Вагинальное осеменение овец замороженной спермой в домашних условиях

У овец овуляция происходит в конце половой охоты, поэтому овец, выявленных в охоте бараном-пробником, осеменяют сразу, и если охота продолжается, то повторно через 12 часов. На следующее утро маток пускают в новую группу для выявления в охоте пробником и при наличии охоты их осеменяют. Выявление половой охоты у овец проводят утром и вечером, до наступления и после спада сильной жары. Замороженная сперма не имеет долгий срок службы после оттаивания. Таким образом, оплодотворение должно быть приурочено близко к овуляции.
Овцам при влагалищном осеменении вводят 0,1 мл неразбавленной спермы, разбавленной – 0,2-0,3 мл. Одна соломина рассчитывается на оплодотворение одной овцы и после оттаивания содержит 40-60 млн. сперматозоидов.
Овцу ставят в специальный станок для осеменения. Вульву обтирают одноразовыми смоченными салфетками, при сильном загрязнении вульвы обмывают тёплой водой и затем вытирают салфеткой. За минуту до самого процесса осеменения дают овце концентраты (200 г).
Перед использованием спермы оператор в защитных очках и в перчатках извлекает соломину из сосуда Дьюара и производит оттаивание, предварительно подготовив все необходимые для этой работы инструменты и оборудование.
Соломины неограниченное время хранятся в сосуде Дьюара в жидком азоте при температуре –196° C. Сосуд Дьюара (далее бак) состоит из двух резервуаров, один внутри другого, соединенные вверху горлышком бака. Пространство между двумя резервуарами полностью герметично и внутри его создан вакуум. Слабо место бака это его горлышко, оно может быть легко повреждено, что приводит к нарушению вакуума и неспособность поддерживать низкую температуру. Мороз снаружи бака около горлышка, царапины или вмятины указывают на разгерметизацию бака. Баки нельзя ставить на что либо, они должны стоять только на полу. На них нельзя сидеть или класть что либо. Чтобы сперма всегда находилась в жидком азоте, сосуд Дьюара предназначенный для её хранения, периодически дозаправляют, при понижении уровня жидкости до 1/3 ёмкости азота. Уровень азота показан на датчике бака, нужно регулярно еженедельно или ежемесячно следить за уровнем азота в баке. Пополнение азотом бака проводится только в сервисном центре и лучше на договорной основе.
Бак обычно содержит 6 стаканов. Каждый стакан содержит около 10 кассет трехгранной или универсальной форм. Два вида сечения и большое разнообразие цветов помогают извлечь нужную соломину в максимально короткое время. В каждой кассете содержится соломина. Соломины бывают с крышечками и без них, объём соломин 0,25 и 0,5 мл. Как правило, на соломинах написана информация, которая идентифицирует донора семени, дату получения семени, штрих-код и т. п.
В верхней части бака, ниже горлышка и до дна внутреннего резервуара бака, температура держится на уровне от минус 196 до минус 150 градусов Цельсия, что является приемлемой температурой для хранения спермы. Даже при уровне азота в баке 10-12 сантиметров, бак будет по-прежнему поддерживать низкую температуру. Ущерб сперме будет происходить, если она подвергается воздействию температуры более чем минус 80° по Цельсию более чем на 4 секунды. Такая температура держится в горлышке бака, где на самом деле, температура поднимется выше 0 градуса Цельсия на самом верху. Из-за этого пластмассовый стакан (с нужной спермой барана) нужно вынимать так, чтобы соломины находились на уровне нижнего края горлышка не более 4-х секунд. Вынимать нужно плавно и осторожно, но не забывать про секунды. Если вы не успели за 4 секунды вынуть соломину, то опустите стакан обратно вниз до дна и повторите попытку через 30 секунд. Правой рукой берут пинцет и концы его охлаждают в жидком азоте до прекращения кипения. Охлажденным пинцетом вынимают одну соломинку, быстро и энергично стряхивают остатки жидкого азота и немедленно переносят в воду для оттаивания. Стакан с оставшимися соломинками опускают на дно бака, который сразу же закрывают крышкой. Многократное вынимание соломин (т.е. подвергание семени воздействию температуры более чем минус 80° по Цельсию на уровне горлышка) снижает жизнеспособность спермы после оттаивания. Поэтому соломины не следует поднимать, если вы не собираетесь вынуть их из бака. Такая практика приведет к минимальным ущербам для спермы.
Сразу же после изъятия соломины из бака, проводят оттаивание спермы. Когда соломина вынимается при помощи пинцета из бака, её следует поместить непосредственно сразу в специальную ванну или термостат для оттаивания семени. Обязательно проверьте температуру воды в оттаивателе термометром до вынимания соломины из бака. Оттаивание происходит в воде, температура которой составляет 37-38° по Цельсию в течении 2-3 минут, в зависимости от типа используемого прибора для оттаивания, согласно инструкции, но больше 5 минут нельзя. Важно, что вся соломина была погружена в воду сразу и при этом было достаточное количество воды. ВНИМАНИЕ!!! Солнечные лучи обладают спермицидными свойствами, поэтому все манипуляции с соломинами нужно проводить только в закрытом помещении, иначе сперматозоиды разрушатся под воздействием ультрафиолетового излучения. Спирт - вызывает гибель сперматозоидов, поэтому инструменты и посуду после обеззараживания спиртом следует обмывать 1%-ным стерильным раствором бикарбоната натрия или 2,9%-ным раствором лимоннокислого натрия. Запрещается хранить медикаменты и дезинфицирующие средства в комнате где происходит процедура подготовки спермы для осеменения. Курить в помещении, где хранят сперму, запрещается. Также нельзя повторно замораживать сперму после оттаивания. Одновременно оттаивают не более 2 доз при условии немедленного их использования (в течение 10-15 мин).
Пинцетом вынимают соломину из оттаивателя, вытирают насухо бумажными одноразовыми салфетками. Соломину следует слегка 2 раза встряхнуть, держа за кончик, чтобы воздушный пузырек поднялся к пробке. Поршень инструмента для осеменения оттягивают примерно на 90 мм и в трубку до упора вставляют соломинку со спермой. Конец ее отрезают продезинфицированными ножницами строго перпендикулярно у самой пробки (или стеклянного шарика) после воздушного пузырька. Ножницы должны быть острыми и использоваться только для отрезания соломинок. При отрезании пробки недостаточно острыми ножницами кончик соломинки сдавливается и становится овальным. В таком случае часть спермы при выталкивании из соломинки остается в защитном чехле.
Дают овце концентраты. Одной рукой в перчатке, увлажненной теплой водой (лучше мыльной), раскрывает у овцы наружные половые губы, другой - вводит пипетку во влагалище не до упора, в направлении вперёд и немного вверх. И плавно нажимает на поршень пипетки до упора. Затем быстро осторожно вынимает пипетку. После этого через 3-5 минут овцу метят и отпускают в отдельный загон для покрытых овец.
Остатки спермы в пипетке, желательно проверить на микроскопе на подвижность сперматозоидов. Микроскоп поставить перед источником света, протереть зеркало, увеличение должно быть в 200 раз. Навести освещение, подключить электрический столик или заправить столик «Морозова» водой с температурой 40-42° градусов Цельсия и установить его на предметный столик так, чтобы поле зрения было равномерно освещено. Взять предметное и покровное стекла, протереть стерильной марлевой салфеткой. Взять подогретое предметное стекло, нанести стеклянной палочкой каплю спермы, сверху положить покровное стекло и определить активность спермиев. При помощи макро-винта опустить тубус до прикосновения объектива с покровным стеклом. Посмотреть в окуляр, медленно подняв тубус вращением макровинта до появления сперматозоидов в поле зрения, а при помощи микровинта навести резкость. Движения 80-90 % сперматозоидов должны иметь прямолинейные поступательные движения. Сперма должна быть густая, так чтобы все поле зрения было заполнено сперматозоидами.

Станок делают полностью из дерева. Он состоит из основания высотой 60-80 см, шириной 100 см и длиной 120 см, самого станка с кормушкой и 3-мя бортами и треугольного отдельного трапа для лёгкого захода в станок овце. А также 2 вида досок (в зависимости от роста овцы), которые когда овца зашла в станок, кладут на рейки станка так, чтобы доска находилась непосредственно под животом овцы. Это чтобы зафиксировать овцу в стоячем положении.