На правах рекламы
Гирин М.В., Сурнев Д.С., Лозовой Д.А., Ельников В.В.
(ОАО «Покровский завод биопрепаратов», Владимирская обл.)
Резюме
На основе данных эпизоотического мониторинга распространения вируса инфекционного бронхита кур (ИБК) на территории РФ научно обоснована стратегия выбора компонентного состава ассоциированной инактивированной эмульсионной вакцины против НБ, ИБК и ССЯ-76, содержащей полиштаммную композицию по компоненту ИБК. Вакцина содержит вирусы ИБК антигенно родственные серотипу Массачусетс, 793/В, российскому варианту и предназначена для бустерной вакцинации промышленной и родительской несушки в птицехозяйствах, где циркулируют вариантные штаммы вируса ИБК. При изготовлении вакцины используются эмбрионы от СПФ-кур. Испытания полученной вакцины показали ее высокую иммуногенность и низкую реактогенность, что позволяет обеспечивать длительный и напряженный иммунитет, а также передачу материнских антител потомству.
Введение
Инфекционный бронхит кур (ИБК) является высококонтагиозным заболеванием, наносящим существенный ущерб промышленному птицеводству. Вирус ИБК поражает верхние дыхательные пути, репродуктивные органы и вызывает нефрозо-нефриты. У взрослых несушек отмечают спад яичной продуктивности, деформацию и обесцвечивание скорлупы, разжижение яичного белка и снижение выводимости [2].
Возбудитель ИБК – коронавирус – чрезвычайно изменчив. Небольшие замены в гене S1 приводят к появлению новых антигенных вариантов вируса [2, 4].
Проведенный в 2003-2004 г.г. на территории РФ мониторинг с помощью ОТ-ПЦР и секвенирования указывает на доминирующее распространение изолятов (около 40%) генотипа Массачусетс. Также довольно часто (5-15%) встречаются изоляты генотипа 793/В, D274, QX, B1648. Кроме того, 27% проб не были отнесены к ранее известным генотипам и составили российскую группу [1]. При дальнейшем мониторинге в 2006 г. был выявлен полевой изолят вируса ИБК, относящийся к генотипу Арканзас [1]. Данное распределение изолятов на территории РФ несколько отличается от распределения на территории ЕС, где доминирует генотип 793/В (33%) , Массачусетс (25%) и Италия-02 (13%) [5].
Рис. 1. Распределение генотипов вируса ИБК на территории РФ и ЕС в 2006 г.
В дальнейшем возможно изменение картины распределения в связи с глобализацией птицеводства и завозом молодняка птицы из-за рубежа, преимущественно из Европы, а также в результате участившегося использования вакцин на основе серотипа 793/B и D274 импортного производства, которые могут послужить причиной возникновения полевых вирусов ИБК [4].
Как правило, защита птицепоголовья основана на применении живых и инактивированных вакцин против ИБК из штаммов серотипа Массачусетс. Их протективная активность против гомологичных полевых изолятов хорошо изучена, однако они обеспечивают лишь частичную защиту от заражения вариантными вирусами ИБК (70% защиты от вирусов, относящихся к группе QX, 60% - от австралийских вариантов) [3].
Рис. 2. Эффективность защиты птицы, привитой вакцинами серотипа Массачусетс.
В связи с этим перед нами стояла задача создания вакцинного препарата для несушек и родителей не только обеспечивающего защиту от особоопасных (НБ) и распространённых заболеваний (ИБК, ССЯ-76), но и создающего надежную защиту от вирусов ИБК, не принадлежащих к серотипу Массачусетс и составляющих больше половины российских изолятов.
Материалы и методы
Вирусное сырье:
Вирусы ИБК. При изготовлении серии вакцины были использованы штаммы «Чапаевский», «Таганрогский» и «Калужский», антигенно родственные серотипу Массачусетс, 793/B и российскому варианту, соответственно.
Вирусы ИБК культивировали в развивающихся эмбрионах СПФ-кур (Lohman Tierzucht, Германия), инактивацию проводили β-пропиолактоном. Инфекционная активность вирусов ИБК до инактивации была не ниже 7,0 lg ЭИД50/см3.
Вирус НБ. Использован штамм «Ла-Сота» с активностью в РГА не ниже 9 log2. Вирус культивировали в развивающихся эмбрионах СПФ-кур (Lohman Tierzucht, Германия), инактивацию проводили β-пропиолактоном.
Вирус ССЯ-76. Использован штамм «B8/78» с активностью в РГА не ниже 15 log2. Вирус культивировали в развивающихся эмбрионах уток, инактивацию проводили β-пропиолактоном.
Масляный адъювант: при изготовлении вакцин использован адъювант Montanide ISA 70 VG (SEPPIC, Франция).
Подопытная птица: использовали цыплят кросса Хай-Лайн-98 90-суточного возраста из промышленного птицехозяйства. На птицефабрике птица была трёхкратно привита против ИБК живой вакциной из штамма Н-120 и двукратно против НБ вакциной из шт. Ла-Сота методом выпойки. Образцы испытуемых вакцин вводили в грудную мышцу по 0,5 см3. В опытных и контрольной группах было по 25 голов.
Контроль иммунитета. Антитела к вирусу ИБК определяли методом ИФА на наборах Synbiotics, для определения титров антител к НБ и ССЯ-76 использовали РТГА, которую проводили согласно общепринятой методике.
Результаты и обсуждение
Средние титры антител по опытным и контрольной группам представлены в табл. 1.
Таблица 1
Формирование иммунного ответа на введение образцов ассоциированной инактивированной эмульсионной вакцины против НБ, ИБК и ССЯ-76
*Примечание: н.о. – не обнаружено
Как видно из таблицы 1, экспериментальный образец полиштаммной вакцины и серийная вакцина показали высокую иммуногенную активность. Вируснейтрализующие антитела в защитных титрах формировались на 28 день после вакцинации. После выхода на максимальный уровень на 60 сутки после прививки, титры антител плавно снижались и обеспечивали требуемый протективный уровень по всем прививаемым компонентам до 300 дней после прививки. В контрольной группе уровень антител существенно не увеличивался (р Образцы вакцины были безвредны и не вызывали выраженной и длительной воспалительной реакции в месте введения.
Список литературы
1. Овчинникова Е.В., Бочков Ю.А., Батченко Г.В. и др. Генетическая характеристика полевых изолятов вируса инфекционного бронхита кур, выявленных в России. Труды Федерального центра охраны здоровья животных. 2007. Т. 5. С. 303-315.
2. Cavanagh, D. & Naqi, S.A. (2003). Infectious bronchitis. In Saif, Y. M., Barnes, H. J., Fadly, A. M., Glisson, J. R., McDougald, L. R. & Swayne, D. E. (eds) Diseases of Poultry, 11th edition, Ames, Iowa State University Press, pp. 101-119.
3. Cook J.K.A., Orbell S.J., Woods M. and Huggins M. Breadth of protection of the respiratory tract provided by different live-attenuated infectious bronchitis vaccines against challenge with infectious bronchitis viruses of heterologous serotypes. // Avian Pathology, Vol. 28, pp.477–485.
4. Ignjatovic J., Gould G., Sapats S. et al. . Isolation of a variant infectious bronchitis virus in Australia that further illustrates diversity among emerging strains // Arc. Virol. – 2006. Vol. 151. pp. 1567-1585.
5. Worthington, K.J., Currie, R.J.W. & Jones, R.C. A reverse transcriptase-polymerase chain reaction survey of infectious bronchitis virus genotypes in Western Europe from 2002 to 2006. // Avian Pathology, V. 37, -P. 274-257.