Эффективность инактивированной вакцины против инфекционной бурсальной болезни из штамма "52/70-М"

Алиев А.С., профессор, д-р вет. наук
Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины
Оганесян В.А., зам. директора, канд. вет. наук
ООО "Биовет"

Для специфической профилактики инфекционной бурсальной болезни (ИББ) практически во всех странах, в том числе и в России, используют живые и инактивированные вакцины. Как правило, в большинстве птицехозяйств вначале цыплят двукратно прививают живыми вакцинами, а в возрасте 16–20-ти недель проводят ревакцинацию инактивированной вакциной [20].

Эта программа профилактики ИББ широко применялась во многих странах в течение ряда лет. Однако в 1987 г. впервые в Англии, а затем в России и других странах появились сообщения о выделении высокопатогенных штаммов вируса ИББ [2, 12, 19]. В этой ситуации эффективность ранее применяемых вакцин оказалась недостаточной, что потребовало поиска новых программ специфической профилактики ИББ.

Так, в Бельгии была отменена иммунизация родительского стада инактивированной вакциной против ИББ, что позволило максимально снизить уровень материнского иммунитета в суточном возрасте и применить уже апробированные вакцины, которые обеспечивали своевременное формирование напряженного иммунитета до заражения цыплят полевым вирусом.

В Голландии для специфической профилактики ИББ в неблагополучных хозяйствах стали применять вакцины из «горячих» штаммов, которые готовят из недостаточно ослабленных? штаммов вируса ИББ. Особенностью этих препаратов является способность подавлять материнский иммунитет и активно конкурировать с изолятами полевого вируса ИББ, что позволяет купировать инфекцию за короткий промежуток времени. Однако они имеют существенные недостатки, связанные с их высокой реактогенностью: вызывают атрофию фабрициевой сумки, поражение почек и отрицательно влияют на рост и развитие птиц. Применение вакцин из «горячих» штаммов должно ограничиваться двумя-тремя турами, причем рекомендуется прививать цыплят не ранее 10–15-дневного возраста.

Wyeth и Chettle (1990 г.) в неблагополучных хозяйствах предложили прививать цыплят 10–18-дневного возраста убитой вакциной [23]. По мнению ряда авторов, преимущество инактивированных вакцин заключается в том, что они обеспечивают формирование устойчивого иммунитета у восприимчивых цыплят, за счет образования высокого уровня специфических антител и, в отличие от живых вакцин, они безвредны и нереактогенны [21, 24]. Ранее нами были опубликованы данные об эффективности однократной вакцинации цыплят инактивированной вакциной против ИББ на основе эпизоотического штамма [3, 4].

Целью наших исследований был подбор штамма, а также изучение условий изготовления инактивированной вакцины против ИББ и оценка ее эффективности в лабораторных и производственных условиях.

В опытах использовали производственный штамм вируса ИББ: аттенуированный — «КБК» и эталонный — «52/70-М», а также эпизоотические штаммы: № 1 — «Синявинский»; № 2 — «Бенедерский»; № 3 — «Дубовляны»; № 4 — «Таллинский»; № 5 — «Раздельнянский».

Штаммы вируса ИББ поддерживали и титровали в культуре клеток МА-104, на 11-дневных эмбрионах СПФ-кур и на цыплятах восприимчивого возраста.

Инактивацию вируса ИББ проводили димерэтиленимином (ДЭИ) [5]. Полноту инактивации проверяли методом 3-х «слепых» пассажей на куриных эмбрионах.

При изготовлении инактивированного препарата в качестве антигена были использованы культуральный вирус (штамм «КБК», 7,0 lg ТЦД50/мл) и гомогенаты тушек куриных эмбрионов или фабрициевых сумок цыплят, зараженных патогенным штаммом «57/70-М» (6,0 lg ЭИД50/мл). В качестве адъювантов использовали гидроокись алюминия, двуокись кремния (аэросил) и минеральное масло — в количестве 30% от общего объема.

Безвредность оценивали путем введения пятикратной дозы препарата цыплятам разного возраста.

Антигенную активность вакцинных препаратов определяли по титру специфических антител в реакции диффузионной преципитации (РДП) и иммуноферментным методом (ИФА).

Иммуногенность полученных препаратов оценивали на цыплятах мясного и яичного кроссов путем однократного введения препарата. Препараты вводили внутримышечно или подкожно в объеме 0,2; 0,3 и 0,5 мл. Спустя 4 недели сыворотки исследовали в РДП и ИФА, а по 10 ( подопытныъх или привитых ?) и непривитых цыплят заражали вирулентным штаммом «52/70-М» в дозе 103 ИД50/мл. Клинические наблюдения за зараженными цыплятами вели в течение 15 дней. До и после 15-ти суток заражения у цыплят определяли бурсальный индекс по общепринятой методике [1].

Сообщения многих авторов [6, 7, 9, 14] указывают на антигенную неоднородность штаммов вируса ИББ, выделенных в России и других странах, с чем связывают неудачи применения существующих? живых вакцин при профилактике заболевания. В этой связи представляют интерес антигенные различия и родство между штаммами возбудителя ИББ.

Антигенное родство штаммов вируса ИББ изучали в РДП путем титрования штаммоспецифических сывороток с каждым исследуемым антигеном. Результаты опыта показали, что эпизоотические и эталонный штаммы вируса, использованные в работе, обладают одинаковой преципитогенной активностью со всеми штаммоспецифическими сыворотками и образуют одинаковые линии преципитации (табл. 1). Активность иммунных сывороток в перекрестной РДП была почти одинакова в отношении гомо– и гетерологичных антигенов, что свидетельствует о наличии общих вирусоспецифических антигенных детерминант.

Таблица 1
Перекрестная активность штаммоспецифических сывороток в РДП (log2) с разными штаммами вируса ИББ

Затем была выявлена перекрестная устойчивость цыплят к исследуемым штаммам. При планировании данного этапа работы руководствовались литературными данными, согласно которым вирусы в инактивированном состоянии не создают перекрестную защиту даже в отношении штаммов, претерпевших незначительную антигенную изменчивость [8], что послужило дополнительным доводом в пользу высокой степени антигенного родства штаммов вируса ИББ.

Для этого было сформировано 7 групп, по 60 цыплят в каждой. Цыплятам в 1–5 группах внутримышечно вводили инактивированные антигены эпизоотических штаммов, в 6-й группе — штамм «52/70-М», после инактивации, в объеме 0,5 мл. Седьмая группа птиц служила контролем. Протективную активность антигенов вируса ИББ оценивали на 28-е сутки опыта серологически (в РДП и ИФА) и заражением по 10 цыплят из каждой группы разными штаммами вируса в дозе 103 ИД50/мл.

Результаты выживаемости птиц после введения разрешающей дозы вируса ИББ приведены в таблице 2, из которой следует, что процент защищенных птиц по группам колеблется в пределах 80–100%, независимо от происхождения штамма заражаемого вируса. Данные опыта по оценке резистентности подопытных цыплят согласуются с серологическими исследованиями по выявлению специфических антител в сыворотке крови, взятой на 28-е сутки после введения антигенов. Уровень антител в РДП и ИФА составил 2,5–3,0 log2 и 1:3560 ÷ 1:4250 соответственно.

Таблица 2
Перекрестная устойчивость цыплят к различным штаммам вируса ИББ

Примечание: в числителе — количество заболевших, в знаменателе — количество зараженных, в скобках — количество павших.

Гибель цыплят в контрольной группе при заражении эпизоотическими штаммами была в 2–2,5 раза выше, чем в группе птиц, зараженных штаммом «52/70-М», что свидетельствует о высокой степени патогенности вновь выявленных изолятов по сравнению с ранее выделенным штаммом. Известно, что штамм «52/70» выделен у больных цыплят в Англии и описан Bygrave A.S. и Faragher J.T. в 1970 г. [17].

Из таблиц следует, что эпизоотические штаммы, циркулирующие в птицехозяйствах стран СНГ, не имеют антигенных различий и обладают родством с известным штаммом вируса ИББ. Об антигенной идентичности штаммов вируса ИББ сообщается в работах зарубежных авторов [18, 25]. Несмотря на близкое антигенное родство известных и вновь выделенных высоковирулентных штаммов вируса ИББ, последние отличаются выраженной патогенностью в отношении цыплят чувствительного возраста и видоизмененным тропизмом к определенным тканям и органам. Однако расшифровать на молекулярно-генетическом уровне структурные участки генома вируса ИББ, ответственные за указанные отличия, не удалось и по настоящее время [22].

Данные опытов в дальнейшем были подтверждены положительными результатами применения инактивированной вакцины из штамма «52/70-М» в неблагополучных птицехозяйствах в различных регионах страны.

Результаты исследований позволяют заключить, что для производства инактивированной вакцины против ИББ может быть использован как эпизоотический штамм, так и ранее выделенные штаммы, отвечающие соответствующим требованиям [10]. Учитывая, что работа с эпизоотическими штаммами требует наличия специально оборудованных помещений и строгого соблюдения санитарных правил, исключающих рассеивание возбудителя в окружающую среду, в дальнейшей работе мы использовали штамм «52/70-М» вируса ИББ.

Существенное расхождение наших выводов об антигенной идентичности с имеющимися литературными данными об антигенной вариабельности возбудителя ИББ, по-видимому, связано с различием методов исследований и использованием в работе разного вирусного материала, что подтверждается данными отдельных зарубежных авторов [16]. По нашему мнению, серотипирование штаммов вируса только по данным исследований в ПЦР или РНГА необоснованно и не имеет практического подтверждения.

Для повышения антигенной активности вируса ИББ применяли адъюванты разного состава. При этом вирусный антиген смешивали с каждым адъювантом и вводили птице внутримышечно по 0,5 мл (табл. 3). Наиболее высокий уровень антител установлен на введение препарата с масляным адъювантом (5,2 log2 в РДП и в ИФА 1 : 9214). Адъювантная способность гидроокиси алюминия и аэросила не имели существенных различий. Наименее выраженный иммунный ответ отмечали у цыплят при введении инактивированного антигена без адъюванта. В дальнейшем для изготовления инактивированного препарата использовали масляный адъювант.

Таблица 3
Антигенная активность инактивированных препаратов вируса в зависимости от свойств адъюванта

Исходным материалом при производстве вакцин является вируссодержащая жидкость с высокой биологической и антигенной активностью. Используя несколько вариантов антигена вируса ИББ (культуральный, эмбриональный и бурсальный), сравнивали антигенную активность инактивированных препаратов с масляным адъювантом. Каждый из указанных препаратов вводили внутримышечно цыплятам 21-дневного возраста (по 10 гол.) в объеме 0,5 мл, и через 4 недели брали у них кровь для определения антител.

Наиболее высокий титр антител наблюдали у цыплят на введение инактивированного препарата, полученного на основе бурсального антигена вируса ИББ (в РДП — 3,0 log2 и 1 : 4340 в ИФА). Антигенная активность препарата из культурального вируса была сравнительно низкой (1,5 log2 в РДП и 1 : 1250 в ИФА). Эмбриональный вариант препарата обеспечивал выработку специфических антител на достаточном уровне (2,8 log2 в РДП и 1 : 4250 в ИФА).

Основываясь на этих данных, в дальнейших исследованиях использовали вирусный антиген с биологической активностью не ниже 6,0 lg ЭИД50/мл, полученный путем заражения эмбрионов СПФ-кур эталонным штаммом «52/70-М».

В последующем изучали антигенную и иммуногенную активность экспериментальной инактивированной масляной вакцины в зависимости от дозы и метода введения препарата. Цыплят 15-дневного возраста прививали подкожно и внутримышечно в дозах 0,2; 0,3 и 0,5 мл. В контроле оставляли 10 цыплят без прививки. Через 4-е недели после прививки все группы цыплят исследовали серологически и заражали эталонным штаммом «52/70-М» (табл. 4).

Таблица 4
Антигенная и иммуногенная активность инактивированной вакцины против ИББ в зависимости от дозы и способа введения

Примечание: в/м — внутримышечно; п/к - подкожно.

Введение вакцины в дозах 0,3 и 0,5 мл вызывает максимальное накопление титров специфических антител, которые обеспечивают высокую степень защиты цыплят (86,7–100,0%), независимо от способа введения препарата. При вирусологическом исследовании фабрициевых сумок цыплят опытных групп, убитых на 4-е сутки после контрольного заражения, выделить вирус ИББ не удалось, тогда как у цыплят контрольной группы, павших в те же сроки, вирус ИББ выделили из фабрициевой сумки. Кроме того, уровни поствакцинальных антител до и после 14-ти суток после экспериментального заражения не имели существенных различий, что свидетельствует о высокой протективной активности препарата при введении в дозах 0,3 и 0,5 мл. Отсутствие признаков заболевания, отрицательные результаты вирусологических исследований и положительная сероконверсия после контрольного заражения привитых цыплят подтверждают факт наличия стойкого биологического иммунитета у вакцинированных птиц, что согласуется с современными представлениями о протективных свойствах биопрепаратов [11, 12].

У некоторых цыплят, привитых внутримышечно в дозе 0,5 мл, в месте инъекции отмечали небольшое уплотнение тканей в виде припухлости. Учитывая, что вакцина в дозе 0,3 мл не вызывает местной реакции и обеспечивает образование напряженного иммунитета как при подкожном, так и внутримышечном введении препарата, во всех дальнейших исследованиях инактивированного препарата вируса ИББ использовали дозу 0,3 мл.

Инактивированная вакцина из штамма «52/70-М» безвредна для мясных и яичных цыплят начиная с суточного возраста.

В опыте по изучению срока годности инактивированной вакцины сравнивали иммуногенность препарата сразу после изготовления и через 3, 6, 9 и 12 месяцев хранения при +4 ÷ +8ºС (табл. 5).

Таблица 5
Иммуногенность инактивированной вакцины против ИББ при хранении

Примечание: в числителе — количество заболевших птиц; в знаменателе — количество зараженных птиц.

Установлено, что иммуногенная активность вакцины в процессе хранения при температуре +4 ÷ +8ºС в течение 12 месяцев не снижается.

Опыт по изучению напряженности и длительности иммунитета проводили на цыплятах 30-суточного и ремонтном молодняке 120-суточного возрастов. Инактивированную вакцину применяли внутримышечно однократно в дозах 0,3 и 0,5 мл в каждой возрастной группе. Через 1, 3, 6, 9 и 12 месяцев после вакцинации птиц исследовали серологически в РДП и в ИФА . Длительность и напряженность иммунитета у птиц, привитых в 30- и 120-суточном возрастах инактивированной вакциной из штамма «52/70-М», сохраняется в течение 12 мес.

По разрешению государственной ветслужбы инактивированную вакцину впервые применили в производственных условиях на птицефабрике «Синявинская» Ленинградской области, неблагополучной по ИББ в период испытаний. Опыты показали, что однократное подкожное применение инактивированной вакцины в возрасте 10-ти суток в дозе 0,3 мл предотвращает массовый отход птиц от вируса ИББ и позволяет купировать очаг инфекции. Поствакцинальных осложнений и случаев проявления заболевания среди привитой птицы не наблюдалось. Сохранность молодняка птиц, вакцинированных убитой вакциной, составила 97,1%.

Контроль напряженности иммунитета через 3 недели после прививки показал наличие группового иммунитета в 99% случаях, среднегеометрический титр антител в ИФА составил 1 : 1504, а в РДП — 1:2 ÷ 1:16. Бурсальный индекс цыплят, привитых инактивированной вакциной, имел высокие показатели на протяжении всего срока выращивания, а в 120 дней составил более 4,0, что является показателем сохранности фабрициевой сумки и высокой иммунологической реактивности организма вакцинированной птицы. В указанном хозяйстве и по настоящее время профилактику заболевания проводят с помощью инактивированной вакцины. В связи с этим вызывает недоумение сообщение Щербаковой Л.О. и др. [15], которые при исследовании в ПЦР патологического материала от больных цыплят на птицефабрике «Синявинская» выявили вакцинный штамм «БГ» вместо высоковирулентного изолята (IBDVRF – 01/97), выделенного в период эпизоотии. При этом авторы утверждают, что оздоровление хозяйства проводилось живой вакциной из штамма БГ, в то время как в хозяйстве с момента острой вспышки ИББ не применяли ни одной дозы данной вакцины.

В 1999–2001 гг. инактивированную вакцину из штамма «52/70-М» испытывали в птицехозяйствах Респ. Удмуртия, Ленинградской, Новосибирской и Оренбургской областей. Вакцину применяли подкожно однократно в дозе 0,3 мл в возрасте птицы 12–15 суток. При изучении напряженности и длительности иммунитета установлено, что у вакцинированных цыплят через 12 месяцев антитела были на достаточно высоком уровне и составили 1 : 2870 в ИФА. Из результатов производственных испытаний следует, что специфическая профилактика ИББ с помощью инактивированной вакцины высокоэффективна и позволяет купировать инфекцию в минимальные сроки. Вакцина не оказывает отрицательного влияния на птицу и обеспечивает защиту от полевого вируса не менее 12 месяцев. На всех птицефабриках отмечено, что на фоне применения инактивированной вакцины значительно снижаются случаи проявления вторичных инфекций, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами (колибактериоз, микоплазмоз и др.).

По результатам лабораторных и производственных испытаний подготовлена и утверждена нормативная документация на инактивированную вакцину из штамма «52/70-М». Штамм «52/70-М» защищен патентом Российской Федерации.

Инактивированная вакцина наиболее эффективна при острой вспышке ИББ, где заболевание регистрируется впервые, и в случаях повторных его проявлений в оздоровленных хозяйствах. При этом следует прививать весь клинически здоровый молодняк, начиная со старшего возраста (30–35 сут.), независимо от сроков последней вакцинации. В дальнейшем необходимо учитывать иммунный статус птицы и эпизоотическую ситуацию в регионе. Цыплят от не иммунных родителей прививают с 5-дневного возраста, а при наличии материнского иммунитета — в 10–15 суток.

Своевременное применение инактивированной вакцины в очаге инфекции позволяет в кратчайшие сроки купировать инфекцию и стабилизировать эпизоотическую ситуацию.

В настоящее время многие специалисты обоснованно ставят вопрос о целесообразности дальнейшего применения вакцин из «горячих» штаммов и создании новых эффективных препаратов против ИББ [13], т.е. возникла необходимость замены одних штаммов другими. На наш взгляд, успешный переход от «горячих» к «мягким» штаммам возможен в два этапа. На первом необходимо укомплектовать родительское стадо, свободное от антител или с низким их уровнем, для чего отменить иммунизацию ремонтного молодняка убитой вакциной против ИББ. Следует учесть, что на это потребуется определенный срок, который зависит от общего поголовья кур-несушек в хозяйстве. Учитывая, что на данном этапе иммунный статус цыплят крайне неоднороден, профилактика заболевания с помощью живых вакцин на таком поголовье довольно рискованна, поэтому рекомендуем птицу в этот период прививать инактивированной вакциной в 10–15-дневном возрасте.

В этой связи очень важно обсудить вопрос эффективности применения убитой вакцины против ИББ среди кур-несушек. Известно, что вакцинация родителей предназначена для получения потомства с высоким и равномерным уровнем иммунитета, который также равномерно снижается, и при достижении определенного порога применяются живые вакцины. Анализ опыта применения убитых вакцин показывает, что в условиях практики заселить в помещение партию цыплят с одинаковым уровнем пассивных антител не удается, так как инкубационное яйцо получают от разновозрастных групп кур-несушек, прививитых убитой вакциной в разные сроки. В таких хозяйствах поствакцинальный иммунитет после 2-кратной вакцинации живыми вакцинами, даже из «горячих» штаммов, формируется в лучшем случае в 35 дней, а, как правило, в возрасте 40 дней. Материнские антитела сохраняются в организме в среднем до 20-дневного возраста, и последующие 15–20 суток птица не имеет специфического иммунитета. В стационарно? неблагополучных хозяйствах, как показывает практика, птица в этом возрасте наиболее восприимчива к вирусу ИББ, а в хозяйствах мясного направления к этому моменту подходят сроки сдачи птицы на убой.

Таким образом, эффект от применения инактивированной вакцины на кур-несушках нулевой, более того, хозяйство несет неоправданные затраты на ее приобретение. Поэтому для повышения эффективности мероприятий по профилактике ИББ целесообразно отменить вакцинацию птиц убитой вакциной против ИББ перед переводом их в родительское стадо (110–120 дней).

Второй этап начинается после замены всего родительского стада на не вакцинированное поголовье. Получаемый от них молодняк птицы свободен от антител или их уровень очень низкий; на этом фоне уже можно проводить иммунизацию суточных цыплят вакцинами из промежуточных штаммов. При этом следует учесть, что на всех этапах перехода необходим строгий серологический контроль в РДП или ИФА за формированием иммунитета.

Проведение вакцинации в суточном возрасте позволяет также решить проблему профилактики ИББ птиц, находящихся в индивидуальном секторе и в фермерских хозяйствах, особенно в весенне-летний период. Известно, что в эти категории хозяйств птица поступает в суточном возрасте и в дальнейшем вопрос плановой вакцинации поголовья не решается. Предпродажная прививка суточных цыплят против ИББ позволить решить и эту проблему.

В заключение отметим, что наиболее серьезную проблему в системе профилактических мероприятий против ИББ в промышленном птицеводстве представляет формирование иммунитета у молодняка птиц, полученных от вакцинированных кур-несушек. Наличие пассивных антител у них препятствует формированию поствакцинального иммунитета.

Результаты иммунологического анализа показывают, что вновь выделенные эпизоотические штаммы не имеют антигенных различий как между собой, так и с эталонным штаммом вируса ИББ.

При сравнительном изучении трех вариантов антигенных препаратов вируса ИББ установлено, что высокой антигенной активностью обладают препараты, полученные из фабрициевых сумок цыплят и эмбрионов СПФ-кур, зараженных вирусом ИББ.

Включение адъюванта в состав вакцины, усиливает ее иммуногенность, причем минеральное масло по адъювантным способностям превосходит гидроокись алюминия и двуокись кремния.

Инактивированная вакцина из штамма «52/70-М» высоко иммуногенна и при однократном введении цыплятам в 10–15-дневном возрасте обеспечивает полную защиту цыплят от высоковирулентных штаммов вируса ИББ на весь восприимчивый период.

Литература:
1. Алиев А.С. Лабораторная диагностика инфекционног бурсита кур // Ветеринария. — 1990. — № 5. — С. 31–33.

2. Алиев А.С. Инфекционная бурсальная болезнь птиц (эпизоотология,этиология,диагностика и профилактика.: Автореф. дис. докт. вет. наук. — СПб., 1993.

3. Алиев А.С. и др. Экономическая эффективность мероприятий против инфекционной бурсальной болезни птиц. / Экономические отношения в АПК: Сб. трудов АМА. — СПб., 1997.

4. Алиев А.С. и др. Сравнительная оценка методов вакцинации против инфекционной бурсальной болезни птиц./ Актуальные вопросы диагностики, профилактики и борьбы с болезнями с/х животных: Тез. Международ. науч.-прак. конф. — Ставрополь, 1999.

5. Алиев А.С. Инактивирующее действие ДЭИ и формальдегида на вирус ИББ. / Ветеринарная профилактика в промышленном птицеводстве: Сб. науч. трудов ВНИВИП. — СПб., 1996.

6. Бирман Б.Я. и др.Оценка эффективности живых вакцин против инфекционного бурсита(Болезни Гамборо)./ / Ветеринарная наука — производству. Минск: 1996. — Вып. 32. — С. 56–59.

7. Борисов А.В. Профилактика бурсальной болезни птиц. // Уральские Нивы. — 1995. — № 4–6. — С. 23–26.

8. Брянцева Е.А. Убитая гриппозная вакцина. — Л., 1997.

9. Муляк С.В., Смоленский В.И. Вакцинопрофилактика инфекционной бурсальной болезнги в неблагополучных хозяйствах. // Ветеринария. — 1996— № 7. — С. 29–34.

10. Панин А.Н., Татаринцев Н.Т. Основные требования к производственным и контрольным штаммам микроорганизмов // Ветеринария. — 1993. — № 4. — С. 28–29.

11. Сергеев В.А. Вирусные вакцины. — Киев: Урожай, 1993.

12. Смоленский В.И. Средства и методы специфической профилактики болезней птиц вирусной этиологии.: Автореф. дис. … докт. биол. наук. М., 1999.

13. Смоленский В.И. Эффективность вакцин против вирусных болезней птиц. // Ветинформ. — 2002. — № 1. — С. 6–7.

14. Щербакова Л.О. и др.Сравнительный анализ вариабельной области гена VP2 вируса инфекционной бурсальной болезни // Мол. Генетика,вирусология и микробиология. – 1998. -№1. –с.35 - 40.

15. Щербакова Л.О. и др. Молекулярная эпизоотология ИББ в России. // Аграрная Россия. — 2002. — № 3. С. 16–19.

16. Becht H.,et al. Comparative studies on structural and antidenic of two serotyres of infections bursal disease virus. // J. Gener. Virol. 1988, v.69, № 3, p.631-640.

17. Bygrave A.C. Faragher J.T.Mortality associated with Gumboro disease // Veter. Rec.,1970, v. 86, № 25, p. 758–759.

18. Brown M.D., et al. VP2 sequencis of European “very virulent” isolates of infections bursal disease virus are closely related to eash other but are distinct from those of “classical” strains.. // J. Gener. Virol., 1994, v.75, № 4, р. 675–680q

19. Chettle N.J.et al. Outbreaks of virulent infections bursal disease in East Anglia/ // Veter. Rec, 1998, v. 42, p. 271-272.

20. Giambrone J.T et alCrowding worsens IBD: a current appraisal. // Broil. Ind., 1985, v. 48, № 12, р. 98–106.

21. Goddard R.D. et al. Use of infections bursal disease vaccines in chicks with matternally derived antibodies // Veter. Rec., 1994, v. 134, № 17, p. 273–274.

22. Van den Berg T.P. Acute infections bursal disease in poultry: a review. // Avian Patology, 2000, v. 29, № 4, р. 175–194.

23. Wyeth P.J. and Chettle. Use of infections bursal diseasevaccines in chicks with matternally derived antibodies/ // Vet. Rec., 1990, v. 126, № 9. p. 577–578.

24. Wyeth P.J. et al. Use of an inactivated bursal disease oil emulsion vaccine in commercial layer chicks/// Vet. Rec., 1992. v. 130, p. 30–32.

25. Yehuda H., et al. Transfer of antibodies elicited by baculovirus-derived VP2 of very virulent infections bursal disease virus strains to progeny of commercial breeder chickens. // Avian Patology, 2000, v. 29, № 1, р. 13–19.