Разработка молекулярно-генетических методов диагностики фитоплазм на базе ФГБУ «ВНИИКР»

В научно-экспериментальном отделе ФГБУ «ВНИИКР» проводится научно-исследовательская работа по изучению фитоплазм. Фитоплазмы – особо опасные фитопатогены, вызывающие заболевания сельскохозяйственных культур, к которым относятся: возбудитель золотистого пожелтения винограда Candidatus Phytoplasma vitis (Flavescence doree) – карантинный вредный организм, отсутствующий на территории РФ, возбудители почернения коры винограда Candidatus Phytoplasma solani (Bois noir), пролиферации яблони Candidatus Phytoplasma mali и истощения груши Candidatus Phytoplasma pyri, включенные в список А2 ЕОКЗР, и возбудитель израстания малины Candidatus Phytoplasma rubi, распространенный в средней полосе России. Для их точного выявления и диагностики применяют молекулярно-генетические методы (ПЦР, секвенирование).
По результатам работы, проведенной младшим научным сотрудником Г.Н. Матяшовой, были оптимизированы методы выделения ДНК фитоплазм из растительного материала, позволяющие выявлять фитопатоген в низких концентрациях. Усовершенствованы методы диагностики фитоплазм, в том числе и карантинного вида, на основе метода ПЦР и секвенирования. Подобраны ферменты рестрикции для проведения RFLP-анализа (анализ длин рестрикционных фрагментов), позволяющего различать группы фитоплазм и идентифицировать карантинный вид.
Установлено, что специфическую систему «BNrt» для ПЦР в «реальном времени» возможно использовать для выявления Candidatus Phytoplasma solani, а система «FDrt», предложенная для карантинного вредного организма Candidatus Phytoplasma vitis, при наличии ложноположительных результатов подходит лишь для скринингового теста.