В 2021 году референтная лаборатория по болезням аквакультуры для подтверждения качества проводимых исследований участвовала в двух раундах Международных сличительных испытаний, организованных Национальным институтом водных ресурсов при Датском Техническом университете, (г. Конгенс-Люнгбю, Дания), который является справочной лабораторией Европейского Союза по болезням рыб и ракообразных, справочной лабораторией МЭБ по вирусной геморрагической септицемии. МСИ проводились в том числе и по методам, на которые лаборатория расширила область аккредитации в 2020 году. В данном испытании приняли участие 46 лабораторий из Европы (страны Европейского Союза, Великобритания, Норвегия, Исландия, Фарерские острова, Босния и Герцеговина, Швейцария, Македония, Сербия и Украина), Африки (Тунис), Азии (Южная Корея и Япония), Северной Америки (США и Канада), Австралии, Новой Зеландии и от Российской Федерации - референтная лаборатория по болезням аквакультуры ФГБУ «ВНИИЗЖ».
8 октября 2021 года в лабораторию поступили две панели из 9 шифрованных образцов, содержащих лиофилизированную надосадочную жидкость от зараженных вирусами болезней рыб культур клеток. Первая панель содержала 5 шифрованных образцов, а вторая – четыре. Кроме позитивных проб, в панели были также негативные, смешанные пробы и пробы, содержащие неизвестные вирусы. Тестирование проводили следующими методами: выявление вирусов весенней виремии карповых, инфекционного некроза гемопоэтической ткани, инфекционного некроза поджелудочной железы, вирусной геморрагической септицемии - методом вирусовыделения в культуре клеток рыб; идентификацию антигена вирусов весенней виремии карповых, инфекционного некроза гемопоэтической ткани, инфекционного некроза поджелудочной железы, вирусной геморрагической септицемии - методом ИФА; обнаружение геномов вирусов весенней виремии карповых, инфекционного некроза гемопоэтической ткани, вирусной геморрагической септицемии, эпизоотического некроза гемопоэтической ткани, инфекционной анемии лососевых, герпеса карповых третьего типа и альфавируса лососевых - методом ПЦР-РВ, а обнаружение генома вирусов инфекционного некроза поджелудочной железы - методом классической ПЦР.
Для титрования вирусов использовали следующие культуры клеток: культура клеток хвостового стебля синежаберного солнечника (BF-2), культура клеток папулезной эпителиомы карпа (EPC), культура клеток хвостового стебля толстоголова (FHM), культура клеток гонад радужной форели (RTG-2).
Все пять тестируемых образцов вызывали вирусспецифическое ЦПД в культурах клеток через 4-5 дней после заражения. В образце №5 материал не проявлял инфекционной активности в культурах клеток FHM и RTG-2. Инфекционная активность вирусов представлена в таблицах 1, 2, 3 и 4.
В образце №1 материал проявлял инфекционную активность в культурах клеток BF-2, EPC, RTG-2 и FHM в титрах 6,35, 7,6, 7,2 и 6,85 lg ТЦД50/см³ соответственно. При исследовании методом ПЦР в реальном времени был обнаружен геном вируса эпизоотического некроза гемопоэтической ткани (EHNV).
Вирус в образце №2 проявлял активность в культурах клеток BF-2, EPC, RTG-2 и FHM в титрах 7,1, 8,35, 8,85 и 8,6 lg ТЦД50/см³ соответственно. При исследовании в ИФА были обнаружены антигены вирусов инфекционного некроза гемопоэтической ткани и вирусной геморрагической септицемии, при исследовании методом ПЦР в реальном времени были обнаружены геномы вируса инфекционного некроза гемопоэтической ткани (IHNV) и возбудителя вирусной геморрагической септицемии (VHSV).
В образце №3 материал проявлял инфекционную активность в культурах клеток BF-2, EPC, RTG-2 и FHM в титрах 6,2, 6,1, 7,0 и 6,6 lg ТЦД50/см³ соответственно. Исследования материала методами ИФА, ПЦР в реальном времени и классическим вариантом ПЦР дали отрицательный результат. Мы сделали вывод, что образец №3 содержит неизвестный вирус (вне области аккредитации лаборатории и не входит в число патогенов для обнаружения в рамках задания для МСИ).
В образце №4 материал проявлял инфекционную активность в культурах клеток BF-2, EPC, RTG-2 и FHM в титрах 7,6, 8,1, 8,1 и 7,85 lg ТЦД50/см³ соответственно. При исследовании в ИФА был обнаружен антиген вируса весенней виремии карповых, а при исследовании методом ПЦР в реальном времени был обнаружен геном вируса весенней виремии карповых (SVCV).
Вирус в образце №5 проявлял активность в культурах клеток BF-2 и EPC в титрах 8,35 и 8,6 lg ТЦД50/см³ соответственно. При исследовании в ИФА был обнаружен антиген вируса инфекционного некроза гемопоэтической ткани, при исследовании методом ПЦР в реальном времени был обнаружен геном вируса инфекционного некроза гемопоэтической ткани (IHNV).
Образцы второй тестируемой панели исследовали методом ПЦР в реальном времени на наличие геномов весенней виремии карповых, инфекционного некроза гемопоэтической ткани, вирусной геморрагической септицемии, эпизоотического некроза гемопоэтической ткани, инфекционной анемии лососевых, герпеса карповых третьего типа и альфавируса лососевых, а также методом классической ПЦР на наличие генома вируса инфекционного некроза поджелудочной железы. При этом в образце №9 геномы вышеуказанных вирусов обнаружены не были. В образце №6 был обнаружен геном альфавируса лососевых (SAV), в образце №7 был обнаружен геном герпеса карповых третьего типа (CyHV-3), а в образце №8 был обнаружен геном инфекционной анемии лососевых (ISAV).
Результаты исследований были предоставлены в «Национальный институт водных ресурсов» 17.12.2021 г.
Материалы окончательного отчета были высланы в ФГБУ ВНИИЗЖ 16 мая 2022 г.
Уровень соответствия результатов, полученных в референтной лаборатории по болезням аквакультуры, зашифрованным пробам составил 100% (образец №3 содержал ранавирус сомовых, который не входит в число патогенов для обнаружения в рамках текущего задания для МСИ).
Сотрудники референтной лаборатории по болезням аквакультуры продемонстрировали высокую воспроизводимость тестов, что подтверждает компетентность и профессионализм сотрудников лаборатории, а также достоверность результатов применяемых при проведении исследований методов. Данные о результатах МСИ отражены в суммарном отчете, представленном провайдером в мае 2022 года.
Источник: Пресс-служба ФГБУ «ВНИИЗЖ»
