>Все . Никаких банок и автоклавов . Скоро попробую данную систему .
Как же вы без автоклава 150 градусов наберете? :) Даже домашняя скороварка дает примерно 120 градусов.
И второе: очень жаль что в интернете много таких авторов статей и не только в области грибоводства... Рано вам KotyaroO, писать статьи, рано...
Уважаемый Котяро !
Хоть Вы мне и земляк , но истина дороже .
Если Вы утверждаете , что вырастили мицелий на каше - то сопроводите данную информацию фотографиями .
Со стороны если какой человек попадет на данный форум - то у него может сложится мнение , что группа придурков обсуждает всякие бредовые идеи . А я как консультант портала по грибоводству не могу допустить данный расклад .
Откройте свою тему под названием " Бредовые идеи в грибоводстве" и обсуждайте технологию выращивания мицелия на каше .
Если Вы серьезный человек , то попросите у соседки кастрюлю-скороварку - через 7 дней я продолжу тему по выращиванию мицелия . Просто повторите все мои действия .
Смысл автоклава , что в нем повышенное давление и поэтому вода кипит при высокой температуре .
Высокую температуру можно и без автоклава получить . В термошкафу например . Ростер или обычная духовка .
Я же говорил , что применяется термостабильная пленка , которая не плавится до 200 градусов . Данная технология широко применяется украинскими грибоводами и описана на их сайтах .
Через неделю у меня жена уезжает и я все это практически опробую и вам покажу . А то надоело выслушивать истерики , что всю квартиру вареным зерном провонял . 2 варианта получения мицелия , с кастрюлей скороваркой и пленкой .
уж нехотите ли вы сказать что вру я поповоду перловки?да вот уже 2 кг сделал мицелия.и посадил.а сейчас снова развожу мицелий.фото обязательно выложу как только появитса норм.интернет.(15 июня).И вот ненадо меня оскорблять-серьёзным небыл никогда я.Пытаюсь найти нечто среднее в изготовлении мицелия в домашних условиях.через месяц я сниму видеоролик о том как я всё делаю.от начала и доканца.Здесь форум и люди делятся информацией.и тут втему я попадаю.а выдорогой Анатолий только зачастую провоцируете людей на "пустой базар".Обещаю выложить всю информацию о том как я всё делаю.я нехочу быть кем то крутым и закрывать темы а хочу чтобы люди посетившие форум нашли информацию без особого труда.
Хорошо , уважаемый Котяро !
Если Вы выложите информацию по выращиванию мицелия на перловке , то я готов перед Вами извиниться . Хотя здорово в этом сомневаюсь .
Перелопатив сотни страниц информации , я ни разу не встречал упоминания о выращивания мицелия на каше . Смысла не вижу искать какие то экзотические способы выращивания мицелия , типа как на каше .
Также здорово сомневаюсь , что без кварцевой лампы и автоклава Вам удалось получить мицелий .
Мне лично больше нравится овес , по сравнению например с пшеницей . Из-за его чешуек он меньше слипается .
Выкладывай .
Там рядом с поселком Юрья был военный городок под названием Солнечный . Я там в школу начал ходить . Он еще цел ?
P.C. Перловая крупа в вареном виде и есть каша . А так как мицелий развивается по всему объему субстрата , то я сдорово сомневаюсь что внутрь каши будет воздух поступать .
Можно не видео , а обычные фото . У меня модем Билайн зараза - скорость маленькая .
Не так все это просто , как написано . Я истратил несколько тысяч рублей и пару лет времени пока получил хороший мицелий , получал вместо мицелия - одну плесень .
Здравствуйте Анатолий ! Будьте добры подскажите начинающему грибоводу откуда можно по почте наложеным платежом заказать качественный мицелий шампиньона и вешенки.Я живу в Сибири в тайге и мы в основном все заказываем через почту. Хотелось бы узнать надежный источник а то в интернете адресов много - но не лохотрон ли ?
Не так все это просто , как написано . Я истратил несколько тысяч рублей и пару лет времени пока получил хороший мицелий , получал вместо мицелия - одну плесень .
Здравствуйте Анатолий ! Будьте добры подскажите начинающему грибоводу откуда можно по почте наложеным платежом заказать качественный мицелий шампиньона и вешенки.Я живу в Сибири в тайге и мы в основном все заказываем через почту. Хотелось бы узнать надежный источник а то в интернете адресов много - но не лохотрон ли ?
А как вы себе представляете "лохотрон", наложенным платежом? Хотите - забирайте посылку, хотите нет...
Вообще лично заказывал: stolbovo.ru - приемлемый мицелий <br/> pokupki24.ru - пару раз прислали с плесенью и не обменяли<br/> gribpost.ru - заказывал один раз, пришел нормальный
Вообще здесь есть тема про то "Как не имея опыта в глухой деревне..." точно не поню название, дак там есь адреса и сриншоты магазинов + некоторые отзывы.
P.S. вы немного не в той теме написали...
Выкладывай .
Там рядом с поселком Юрья был военный городок под названием Солнечный . Я там в школу начал ходить . Он еще цел ?
P.C. Перловая крупа в вареном виде и есть каша . А так как мицелий развивается по всему объему субстрата , то я сдорово сомневаюсь что внутрь каши будет воздух поступать .
Можно не видео , а обычные фото . У меня модем Билайн зараза - скорость маленькая .
Знаете, по личному опыту, я когда начинал пробовать выращивать мицелий, делал это на рисе... Та еще история :) НО росло, плохо, и не понятно где мицелий, но всеже росло. Любую кашу можно сварить как клестер, но также любая каша может быть рассыпчатой. Это факт! Не думаю что его ктото будет оспаривать. Предлагаю просто поверить наслово котяро, и не продолжать бессмысленный спор. А вы, котяро, просто ради эксперимента, попробуйте на пшенице или на овсе(на овес не советую, сложно промывать, он не тонет). Сравните результат, а там уж какие выводы сделаете, прав ли был Анатолий или нет.
Уважаемый DASES указал адреса Интерне-магазинов . Там можно покупать , но дорого . Первый раз можно попробовать , но потом надо на прямого поставщика выходить . Например , в разделе Статьи - статья о мицелии на палочках . Там координаты .
Лучше брать зерновой мицелий , но в жаркую погоду можно получить типа этого : Файлы: 314.jpg
В моем посте два магазина(покупки24 и столбово) это реселлеры, там действительно дороговато. Последний (грибпост) продает только мицелий, там не дорого. Еще есть http://wer23sd.narod.ru , они тоже занимаются продажей только мицелия, но в последнее время что то не отвечают. Кстати, Анатолий, может знаете где купить в небольших партиях мицелий Сильван, давно хочу попробовать, но никак не могу найти тех, кто отправит его по почте...
Сильван я и сам хотел купить , но у тех продавцов что я нашел минимальная партия - 32 кг зернового мицелия и отправка по почте . Мне такое количество в настоящий момент - многовато . И зерновой мицелий по почте можно получить в таком виде , что я выше фото выложил .
На следующей неделе продолжу тему по выращиванию зернового мицелия - с палочек в конвертах .
Их сайт :
www
gribnoyogorod
vrn
ru
Бросал их палочки в вареный овес , начал расти мицелий . Но до конца не довел . Через неделю .
Сильван я и сам хотел купить , но у тех продавцов что я нашел минимальная партия - 32 кг зернового мицелия и отправка по почте . Мне такое количество в настоящий момент - многовато . И зерновой мицелий по почте можно получить в таком виде , что я выше фото выложил .
На следующей неделе продолжу тему по выращиванию зернового мицелия - с палочек в конвертах .
Их сайт :
www
gribnoyogorod
vrn
ru
Бросал их палочки в вареный овес , начал расти мицелий . Но до конца не довел . Через недел
... Пос палочкам, я уже вырос, как минимум год назад :) из них я "выжал" все что можно, и на агар садил, и на зерно... Хочу попробовать международного стандарта :) 32 кг? а цена? понимаю что возможно нарушаю правила, в связи с чем ответте мне в личку :)
кстати первые фотографии сделаны на перловке.посмотрите на шапку.также вскором времени выложу фото полностью готового мицелия на перловке.и вот ещё-тема тут не совсем для обсуждения адресов магазинов и всякой "где да как купить какой мицелий".извините.
Мицелий в домашних условиях можно выращивать и выращивают на перловке, гречке, коричневом рисе, на макаронах, на горохе, на лузге.
Просто выращивание на пшенице это пришло из промышленных технологий. Да и пшеница меньше закисает и быстрее обрастает. Например если гречку перемешать то рост мицелия останавливается, перловка подвержена закисанию, рис подвержен аспергилам. В субстрат еще рекомендую добавлять гипс или мел 1-3% это влияет не светочувствительность примордия и на уменьшение СО2 в субстрате, плюс ставится рН барьер от триходермы.
Просто перловку надо варить не как для человека кашу а соотношении с водой 1 к 1, с добавлением 3% перекеси водорода, и последущей промывкой холодной водой, дать стечь воде на дуршлаке 1-2 часа. Вот тогда это не будет кашей.
Молодец , Турбо , все по делу сказал .
Я только покупаю перекись водорода в магазине "Химприбор" в концентрации 70 % и потом развожу его водой- так дешевле .
А после слива воды сушить все равно нужно = закиснет .
Я бы еще попробовал ( по данным одной публикации ) выращивать мицелий на смеси пшеницы и субстрата из соломы . В этом случае :
- лучше доступ воздуха
- лучше потом растет мицелий на соломе
- меньше на таком субстрате плесени растут
И рост мицелия я провожу в пластиковых пакетах . Так гораздо удобнее . Не надо потом из банки выковыривать . Файлы: 22_13.jpg
Выращивание грибов. Советы начинающим
Мудрость, рожденная в простом
Автор: Terri Marie Beauséjour
Copyright 1999, all rights reserved.
Если перспектива выращивания собственных грибов окрылила вас, то первые же попытки, скорее всего, повергли в уныние в связи со сложностью и потенциальной дороговизной таких вещей, как «стерильные технологии,» «чистые помещения», «ламинарные боксы» и «агаровые питательные среды». А может быть вы, будучи склонны к исследованиям, проделали немалую работу, героически пытаясь отделить чистые культуры мицелия, и все лишь для того, чтобы увидеть, как нежный белый мицелий расцветает всеми цветами радуги, благодаря пушистым спорам плесени, или превращается в лоснящиеся лужицы жидкости в связи с бактериальным заражением. Мужайтесь, вы не одиноки!
Являясь председателем Комитета по культивированию Микологического общества Сан-Франциско (MSSF), я общаюсь с многими людьми, посвятившими себя культивированию грибов, и они подтверждают, что указанные выше сложности - это две основные преграды, тормозящие прогресс в грибоводстве. Признавая необходимость в оказании помощи по преодолению указанных проблем, Комитет по культивированию MSSF периодически организовывал лекции и семинары, посвященные вопросам выращивания грибов. Я весьма признательна преподавателям, принимавшим участие в тех семинарах за методики, которые я предлагаю в этой статье.
Цели и задачи
Наиболее разумная цель, конечно, начать с одного плодового тела гриба и вырастить из него целый букет грибов. Грибы могут быть размножены двумя способами—спорами (это аналог семян у растений) или путем воспроизведения ткани, извлеченной из плодового тела (аналогично вегетативному размножению растений через прививание). Для начала мы будем использовать второй способ, который проще и дает начинающему грибоводу лучшие шансы на успех.
Задачи у нас вот какие:
Начать со стерильного фрагмента грибной ткани и перенести его на питательную среду (на самом деле, этот процесс будет последовательно проводиться в три этапа на различных средах, как вы увидите дальше) Из основной культуры создать несколько ее образцов Избежать заражения культуры И, наконец, создать среду и условия, в которых грибной организм начнет плодоношение.
Ваша культура должна пройти через три отдельные фазы (См. Рис. 1):
Стерильная культура на агаровой среде
Стерильная культура на зерне, известная также как «зерновой мицелий»
Плодоношение на пастеризованном субстрате
Пусть слово «стерильность», наряду с новыми терминами, не смущает и не останавливает вас. Да, потенциальные источники заражения существуют повсеместно в окружающей среде: в наших домах, даже в чистых комнатах и лабораториях. Цель состоит в том, чтобы предотвратить их попадание в разводимую культуру и исключить «борьбу» за питательную среду, оставив исключительной право ее использования нашим грибным культурам. Обладая определенной аккуратностью и после небольшой тренировки с использованием простых методик, этот процесс может быть успешно освоен каждым. В общем, дышите глубже и читайте о деталях процесса дальше, шаг за шагом.
Рис. 1 -- Это действительно просто! (Рисунки выполнены T.
Beauséjour)
Комментарий к тексту на рисунке (по часовой стрелке): Sterile Tissue Culture - стерильная ткань гриба,Inоculation in Grain - инокуляция зерна, Incubation of Spawn - рост зернового мицелия,Transfer to Final Substrate - перенос на основной субстрат, Mushrooms Fruiting in Substrate - плодоношение грибов на субстрате.
Шаг I: Подготовка агара и стерильной культуры
Подготовка агара: Первым шагом является подготовка агаровой питательной среды. Произведенный из морских водорослей агар, в совокупности с добавочными ингредиентами, часто используется для первоначального разведения и дальнейшей изоляции культур. Микробиологи приспосабливают агаровую среду для селекционного выращивания грибов путем добавления различных питательных веществ, таких как минералы, антибиотиков и т.д. Агаровая среда обладает и тем ценным качеством, что микроорганизмы, вызывающие заражение, без труда обнаруживаются на поверхности среды и таким образом, они могут быть уничтожены на самых ранних стадиях процесса роста.
Для разведения грибного мицелия могут быть использованы несколько типов агаровых сред. Наиболее часто используют картофельный агар (Potato Dextrose Agar, PDA) и мальтодекстриновый агар (Malt Dextrose Agar, MDA). Готовые смеси промышленного изготовления доступны в самых различных магазинах. Правда, они могут оказаться несколько дороже, чем при самостоятельном приготовлении агара, но если позволяют средства и не хочется тратить драгоценное время, то готовые смеси - это хороший выбор. Для тех, кто привык все делать своими руками, ниже приводятся два способа приготовления картофельного агара (PDA). Первый способ, уже не раз мною опробованный, основан на методике, описанной в издании The Mushroom Cultivator (“Грибовод”), авторы Paul Stamets и J.S. Chilton. Второй способ с успехом используется и пропагандируется грибоводнической группой MSSF. Попробуйте первый или второй способ, или же оцените оба. Вскоре вы сможете определиться, какой из способов лучше подходит для вас, а может быть, на основе полученного опыта вы придумаете свой способ, который со временем несомненно преобразуется во что-то еще. Процедура приготовления выглядит так же, как описание рецепта из поваренной книги.
Материалы, необходимые для обоих методов
Хлопчатобумажный бинт (продается в аптеках)
Алюминиевая фольга
Пробирки с накручиваемыми колпачками для автоклавной обработки - можно найти у снабженцев по медицинскому оборудованию или попросить в лаборатории. Лаборатории иногда избавляются от больших количеств таких пробирок. Поищите, поспрашивайте.
Небольшая воронка для заполнения пробирок
Мерные чашки
Скороварка
Две литровые бутылки или колбы с узким горлышком. Первым делом, несколько слов о скороварке. Скороварка - это, возможно, наиболее дорогостоящая вещь из всего инвентаря грибовода. Если она у вас уже имеется и ее размеры позволяют разместить внутри бутылки или банки, то можно считать, что вы полностью укомплектованы. Если нет, то новая скороварка обойдется вам приблизительно в $75 - $250, в зависимости от размера и места покупки. Скороварки продаются во многих хозяйственных магазинах, торгующих кухонной утварью.
Если у вас сложности с бюджетом, можно пойти по экономному пути и поискать скороварку на распродажах или на барахолке. Можно найти практически новую скороварку за $15 - 35. Постарайтесь найти скороварку с манометром, а не просто с клапаном-колпачком и без указателя давления. В любом случае, какую бы скороварку вы ни выбрали, очень важно соблюдать все правила безопасной эксплуатации, определенные производителем.
Картофельный агар. Метод №1
(Для приготовления приблизительно 1 литра среды)
Необходимые материалы:
300 грамм картофеля
20 грамм агара (поищите в организациях по снабжению медицинских лабораторий, магазинах здорового питания или на азиатских продовольственных рынках)
10 грамм декстрозы или другого сахара 2 грамма пивных дрожжей (необязательно)
Сварите картофель в 1 литре воды в течение 1 часа. Откиньте картофель, сохранив отвар. Разомните картофель, добавьте масла, соли и перца и съешьте. Сметана, лучок и другие приправы - по вкусу :). После того, как мы заморили червячка картофельным пюре, возьмем картофельный отвар, агар, сахар, дрожжи (необязательно) и хорошенько все смешаем в кастрюле. Для этой цели хорошо подходит веничек для взбивания, но взбивать не следует, нужно просто перемешивать. Наполните полученной смесью бутылки или колбы. Заполняйте емкости только на половину или три четверти объема. Закройте горлышки бутылок или колб хлопчатобумажными тампонами и оберните алюминиевой фольгой. Залейте в скороварку воду, чтобы она закрывала дно слоем в 1.5 см., поместите внутрь скороварки сетку, на которую поставьте бутылки или колбы. Поставьте на скороварку крышку и защелкните ее должным образом. Включите плиту и подождите, пока из скороварки не пойдет пар. После вентиляции в течение нескольких минут, закройте клапан (в соответствии с инструкцией к конкретной скороварке).
Кипятите бутылки под давлением 1 атм. (121 градус по Цельсию) в течение 15 минут. Не позволяйте температуре подниматься выше 121 градуса даже на самое короткое время, иначе произойдет карамелизация среды и она придет в негодность.
Через 15 минут выключите газ и дайте скороварке медленно остыть (в течение примерно 45 минут). Тем временем, снимите с пробирок колпачки, установите пробирки на штативе или в чистых консервных банках и поставьте штатив или консервные банки на чистую рабочую поверхность в месте, свободном от пыли. Когда бутылки с питательной средой остынут и их можно будет брать с помощью чистого полотенца или варежек для микроволновой печи, извлеките их из скороварки и перенесите к пробиркам. Круговыми движениями слегка перемешайте питательную среду, а затем удалите фольгу и хлопчатобумажные тампоны. Используя воронку, заполните пробирки примерно на одну треть. Наверните свободно колпачки на пробирки, поместите банки с пробирками в скороварку (убрав из скороварки лишнюю воду, если нужно), дождитесь увеличения давления до 1 атм. (121 градус по Цельсию) и оставьте вариться на 30 минут. После этого снова дайте скороварке постепенно остыть, чтобы давление снизилось до нормального.
Извлеките пробирки и закрутите колпачки плотнее. Закрепите пробирки каким-нибудь способом в наклоненном положении, чтобы поверхность агаровой среды приобрела «скошенный» вид, предоставляя максимальную поверхность для дальнейшего роста мицелия. (Пробирки, приготовленные таким образом, часто называют «косым агаром»).
По мере того, как среда охлаждается, она будет застывать в виде желе и, в конечном счете, пробирки можно будет вернуть в вертикальное положение; агаровая среда при этом останется на месте. Если пробирки не предполагается использовать сразу, их можно поместить в зип-локи и хранить в холодильнике в течение недель или месяцев. В дальнейшем, перед использованием пробирок из холодильника, необходимо убедиться в отсутствии заражения среды плесенью или бактериями.
Картофельный агар. Метод №2
(получается около литра питательной среды)
Необходимые материалы:
10 унций или 284 грамм картофеля
¾ унции или 21.3 грамм агара
¼ унции или 8 грамм декстрозы - можно заменить столовым сахаром
Шаг 1: Смешивание ингредиентов
Вымойте картофель, но не срезайте кожуру. Порежьте на небольшие кусочки.
Сварите картофель до хорошей готовности в полулитре воды. Процедите и сохраните отвар. Картофель можно выбросить или использовать в пищу.
Смешайте декстрозу/сахар, картофельный отвар и агар в металлической или термостойкой стеклянной чашке. Добавьте воды до литра.
Шаг 2: Растворение агара
Поместите агаровую смесь в скороварку. Накройте чашку алюминиевой фольгой.
Дождитесь, пока давление в скороварке поднимется до 1 атм. Варка в течение 20 минут приведет к полному растворению агара. Оставьте скороварку для медленного остывания.
Шаг 3: Заливка агара в пробирки
С помощью варежек для микроволновки и мерного стакана заполните каждую пробирку примерно на треть объема. Вместо штатива для пробирок могут быть использованы консервные банке. Оставшийся агар можно сохранить в бутылке, закрытой хлопчатобумажным или синтепоновым тампоном, а стерилизовать позже, вместе с пробирками. Если пробирки достать не удалось, вместо них можно использовать небольшие бутылочки. Если пробирки закрываются пластиковыми колпачками, то они должны закрываться неплотно, чтобы давление в процессе стерилизации выравнивалось. Хлопчатобумажные или синтепоновые тампоны помогают избежать этой проблемы, но при этом потребуется накрыть пробирки алюминиевой фольгой, чтобы капли конденсата с крышки остывающей скороварки не попадали на пробки.
Шаг 4: Стерилизация агара
Поместите пробирки/бутылки, содержащие агар, в скороварку и стерилизуйте под давлением 1 атм. в течение 25 минут. В эти 25 минут не входит время, необходимое для достижения нужного давления в скороварке. Дайте скороварке медленно остыть. Быстрый сброс давления может привести к интенсивному вскипанию агара в пробирках, выплёскиванию его через тампоны и колпачки пробки и к возможному заражению.
Шаг 5: Наклонное расположение пробирок
Протрите 10% раствором хлорсодержащего отбеливателя стол, на котором будут расположены в наклоненном положении пробирки. Работу следует производить в помещении без сквозняков. Надев кухонные варежки, расположите горячие пробирки на столе в наклоненном положении, положив пробирки одним краем на подходящий предмет. Предварительно стоит поэкспериментировать с деревянными брусочками или стопкой журналов для того, чтобы подобрать нужный угол наклона.
После желатинизации агара закройте плотнее колпачки. Готовые пробирки или бутылки следует хранить в прохладном, свободном от пыли месте. Покрытие из алюминиевой фольги предотвратит возможность заражения пробирок до их использования.
Методики стерильной работы с грибной культурой
После того, как агаровые пробирки остыли, самое время заняться разведением грибной культуры.
Необходимые материалы:
Скальпель или очень острый нож с тонким лезвием
Спиртовка или пропановая горелка с баллончиком, зажигалка или спички Металлические консервные банки или штативы для пробирок с косым агаром и одна банка и штатив для хранения готовых пробирок Держатель для скальпеля или ножа (см. ниже примеры для самостоятельного изготовления)
Микропористый бинт (такой, как в аптечках первой помощи, продается в аптеках) или обычный бинт (более дешевый вариант) Распылитель с раствором из 10% хлорсодержащего отбеливателя и 90% воды (необязательно)
Свежее, чистое плодовое тело гриба или грибов (для начинающих микологов очень рекомендуется использовать вешенку)
Выберите место в доме, офисе или лаборатории, свободное от пыли и возможных источников плесени или грибков. Работы производите на устойчивом столе или стойке, предварительно вымыв поверхность теплой мыльной водой и вытерев насухо (для дополнительной защиты можно также обработать поверхность аэрозолем из 10% раствора отбеливателя и вытереть затем насухо чистой тряпкой или бумажной салфеткой.) Закройте все окна, чтобы свести к минимуму циркуляцию воздуха (в идеале, постарайтесь перенести работы по культивированию на утренние часы, пока воздух чист от пыли, поднимаемой в воздух активными домочадцами). Разложите все материалы в готовом для работы виде и в пределах удобной досягаемости. Поместите агаровые пробирки в металлическую консервную банку (банки) или штативы. Зажгите свет или включите светильник. Тщательно простерилизуйте лезвие скальпеля в пламени и положите скальпель на подставку. Подставку можно выгнуть из проволоки (например из старой вешалки), жестяной банки или другого подручного материала. Целью изготовления такой подставки является обеспечение устойчивого положения инструмента, чтобы его лезвие, пока оно не используется, находилось возле пламени во избежание заражения.
Для начала возьмите свежий, чистый гриб. Несмотря на то, что внешняя поверхность грибного тела может содержать бактерии и споры плесени, внутренняя ткань обычно свободна от организмов, вызывающих заражение, если только гриб не перенасыщен водой.
Оторвите или отломите часть гриба (не отрезайте с помощью ножа, потому что лезвие занесет инфекцию с внешних поверхностей). Положите гриб на стол чистой поверхностью вверх (эта поверхность не должна касаться стола). Цель тут состоит в том, чтобы получить чистую, открытую поверхность, от которой может быть отделен очень небольшой кусочек грибной ткани, а сам кусочек оставался бы, насколько это возможно, нетронутым, пока не будет помещен в пробирку.
Сейчас вам нужно расположить рабочие материалы так, чтобы пробирка, пока вы помещаете в нее кусочек грибной ткани, как можно меньшее время оставалась открытой. Для того, чтобы вероятность заражения была минимальна, недопустимо класть пробирку или пробку на стол. Этот момент представляет некоторую сложность. Будет полезно сперва попрактиковаться с пустой пробиркой перед тем, как использовать «боевую» пробирку с агаром и грибную ткань. Дальнейшие указания подразумевают, что вы - правша. Если нет, то все придется делать в зеркальном порядке. Держите левую руку так, чтобы большой палец смотрел вниз, а остальные пальцы были расположены горизонтально. Поместите пробирку между средним и безымянным пальцами левой руки так, чтобы безымянный палец был сверху, средний - снизу пробирки, а пробка смотрела в направлении от руки. Пробирку следует держать только в горизонтальном положении, чтобы частицы из воздуха не попадали в горлышко пробирки. Скошенная поверхность агара, на которую вы будете помещать грибную ткань, должна смотреть вверх. Осторожно снимите пробку с пробирки и поместите ее между безымянным пальцем и мизинцем так, чтобы мизинец был сверху, а безымянный палец - снизу. (См. Рис. 2).
Рис.. 2 -- Немного мудрёно, но практика помогает
Используя свободные указательный и большой палец левой руки, крепко возьмите кусочек гриба с чистой поверхностью, смотрящей вверх или вбок. Правой рукой уверенно возьмите скальпель, держа его за ручку наподобие карандаша. Кончиком лезвия отрежьте от чистой грибной ткани очень маленький кусочек треугольной формы. Осторожно отделите грибную ткань и быстро поместите внутрь пробирки на край горлышка. Если нужно, стряхните кусочек гриба со скальпеля постукивающими движениями. Положите скальпель на место и быстро закройте пробирку пробкой. Теперь несколько раз постукайте нижней частью пробирки о тыльную сторону ладони для того, чтобы переместить грибную ткань на агаровую поверхность (См. Рис. 3). Поставьте пробирку в другую консервную банку, предназначенную для хранения инокулированных пробирок.
Рис. 3 -- Перемещаем с помощью постукивания
Комментарий к тексту на рисунке: Move to Here by Tapping the Tube
against the Heel of the Hand - переместите в это место путем
постукивания пробиркой по тыльной стороне ладони, Insert Here -
поместите сюда
Есть! Теперь у нас имеются очень хорошие шансы на то, что полученная культура гриба является чистой.
Проделайте то же самое с оставшимися пробирками и грибным материалом. Изготовление нескольких пробирок с каждого образца гриба важно по той причине, что даже при самой аккуратной работе иногда случаются заражения. После проведения инокуляции очередной пробирки простерилизуйте заново скальпель или лезвие ножа на пламени и оторвите свежий кусочек гриба, чтобы открыть другой участок чистой ткани грибного тела. После того, как работа с пробирками завершена, закрутите плотнее колпачки и обверните на каждой пробирке место, на котором колпачок граничит со стеклом, при помощи микропористой ленты. Микропористая лента позволит культуре «дышать», но предотвратит попадание инородных организмов через горлышко пробирки. Пометьте пробирки перманентным маркером или небольшими наклейками , указав дату и информацию о содержимом. Наконец, поместите инокулированные пробирки в темное и прохладное место (наилучшая температура 13 - 21 градусов по Цельсию). Через некоторое время (от нескольких дней до недели) грибная ткань станет пушистой, что связано с началом роста мицелия. Через несколько недель мицелий полностью покроет поверхность агара.
Если показалась плесень (ее легко распознать по спорам зеленого, черного или другого цвета) или бактериальное заражение (обычно окрашенная лоснящаяся субстанция ), то эта культура подлежит немедленному уничтожению, а пробирки и пробки следует вымыть в горячей мыльной воде. По возможности, пробирки с зараженной культурой нужно освобождать в отдельном месте, подальше от здоровых культур. Например, выйдите на улицу и выбросите содержимое прямо в мусорный бак. Для освобождения пробирки от питательной среды можно использовать китайскую палочку для еды; среду можно извлечь сразу целым кусочком или по частям. Шаг II: Методики стерильного переноса и зерновой мицелий Стерильный перенос на ряд агаровых пробирок Полученная агаровая пробирка, содержащая грибной мицелий, является «мастер-культурой» (маточной культурой). Если есть желание размножить культуру для того, чтобы иметь ее запас или чтобы поделиться с другими грибоводами, следует перенести грибной материал из одной пробирки в несколько других пробирок. Эту работу можно выполнить, используя точно такую же методику первоначального стерильного переноса, как это было описано выше.
Тем не менее, вместо использования фрагмента грибной ткани, взятого из плодового тела гриба, можно взять небольшой кусочек агара, содержащего мицелий из пробирки с маточной культурой. Перенос производится с помощью скальпеля или другого подходящего приспособления, например, инокуляционной петли, которую можно купить или изготовить самостоятельно из отрезка проволоки, прикрепленного к какой-нибудь ручке. (См. Рис. 4)
Рис. 4 -- Простое приспособление
Комментарий к тексту на рисунке: Inoculation Loop - инокуляционная
петля
Еще раз повторюсь, обязательно стерилизуйте инокуляционную петлю после каждой произведенной инокуляцией и сократите до минимума время, в течение которого пробирка остается открытой. После небольшой тренировки такие переносы будут получаться быстро и с превосходными результатами. Стерильный перенос на зерно для создания посадочного мицелия Следующим шагом в процессе культивирования будет увеличение количества мицелия путем выращивания его на зерне, получение так называемого «зернового мицелия». Грибные культуры, выращенные на зерне, легко размножаются при перетряхивании зерна и, как будет видно дальше, путем переноса из одной емкости в другую. Например, одна бутылка зернового мицелия может быть использована для инокуляции многих десятков литров плодоносящего субстрата. Зерно достаточно дешево и всегда имеется в магазинах здорового питания или в магазинах для животных.
Зерно легко колонизируется многими сапрофитами, с число которых входят
такие виды, как Pleurotus (Вешенка, устричный гриб) и Agaricus (шампиньон и его сородичи).
Вот две одинаково хорошо зарекомендовавшие себя методики. В первой используются бутылки объемом 0.33 или литровые из-под пива, воды или напитка и зерно пшеницы, которое можно заменить ржаным. Во второй методике используются стеклянные банки для консервирования и зерновой корм для птиц. Несмотря на то, что в обоих случаях возможны вариации с видами используемого зерна, изначально эти методики дают немного разные результаты. Попробуйте несколько вариантов и выберите для себя наилучший.
Основное преимущество бутылок состоит в том, что их горлышки имеют меньший размер и, соответственно, шансы на заражение также меньше. Это преимущество в дальнейшем может обернуться недостатком: через узкое горлышко гораздо труднее извлечь содержимое бутылки. Если у вас есть (или вы приобретете позже) бокс, снабженный антибактериальным HEPA-фильтром для работы в чистом ламинарном потоке воздуха ( это сведет проблему заражения к минимуму), то я рекомендую использовать банки, потому что с ними проще работать. Тем не менее, если вы умеете работать аккуратно, то можно достичь успеха при использовании любой технологии, даже без использования стерильного бокса. (См. Рис. 5)
Рис. 5 -- Два способа разведения мицелия
Комментарий к тексту на рисунке:
Слева: Spawn Method #1 - Метод размножения #1, Aluminium Cover - алюминиевый колпачок, Cotton Plug - хлопчатобумажный тампон, Mycelial Tissue - мицелий.
Справа: Spawn Method #2 - Метод размножения #2, Microporous Filter - бактериальный фильтр, Aluminium Cover - алюминиевая крышка, Mycelial Tissue - мицелий.
Материалы, необходимые для обеих методик:
Скороварка достаточного размера, чтобы вместить бутылки или банки Алюминиевая фольга Зерно (пшеница, рожь, просо или сорго)
Приготовление зерна, метод №1
Необходимые материалы
Чистая 0.33 или литровая бутылка из-под пива, воды или напитка.
Хлопчатобумажный бинт или синтепон (аналогичный набивке в подушках)
Зерно (пшеница, рожь, просо или сорго)
Рецепт для бутылки 0.33:
1/3 чашки пшеницы или другого зерна
¼ чашки воды
Рецепт для литровой бутылки:
1 чашка пшеницы
2/3 чашки воды
Руководство по работе с зерном и бутылками
Есть одно важное замечание, касающееся приготовления зерна: объем зерна увеличивается примерно вдвое после его варки или стерилизации. Правило большого пальца звучит так: заполняйте контейнер сухим зерном только на одну треть. При использовании бутылок, воздухопроницаемая пробка может быть изготовлена из хлопчатобумажного бинта (продается в аптеках) или из синтепона (продается в магазинах тканей).
Приготовление/Стерилизация
Зерно может быть приготовлено/стерилизовано в один или два этапа. Процесс в два этапа дает очень однородный продукт, но если имеющееся время ограничено, то варка и стерилизация могут быть произведены одновременно.
Процесс в два этапа
После того, как бутылки заполнены зерном и водой, поместите их в скороварку и накройте листом алюминиевой фольги. Фольга предохраняет воздухопроницаемые пробки от увлажнения конденсатом. Сварите зерно в скороварке под давлением 1 атм. в течение семи минут. Дайте скороварке остыть а потом, надев кухонные варежки, перетрясите горячие бутылки, чтобы влажные и сухие зерна перемешались. Поместите контейнеры обратно в скороварку и стерилизуйте при давлении 1 атм. в течение 45 минут. Время разогрева скороварки в эти 45 минут не входит. Затем дайте скороварке медленно остыть.
Извлеките бутылки и перетрясите еще раз, чтобы перемешать зерно. Накройте фильтрующие пробки бумагой, чтобы на них не попадала пыль. Это поможет избежать заражения. Хранить бутылки нужно в шкафу или коробке, в свободном от пыли месте. В связи с тем, что зерно с течением времени постепенно высыхает, не следует заготавливать бутылки слишком заранее.
Процесс в один этап
Порядок действий такой же как выше, но варка производится просто в течение 45 минут при давлении 1 атм. После того, как скороварка уже остыла, но бутылки все еще горячие, извлеките бутылки с помощью кухонных варежек и перетрясите их, чтобы влажные зерна перемешались с относительно сухими. Правильно приготовленное зерно выглядит разбухшим и легко перетряхивается с характерным «звонким», но мягким звуком. Переваренные зерна, приготовленные с избытком воды, зачастую лопаются. В результате, крахмалистое содержимое способствует слипанию зерен, делая перетряхивание затруднительным. Зерно, приготовленное с недостаточным количеством воды, будет твердым, сморщенным и непригодным для роста мицелия. Приготовление зерна, метод №2 Необходимые материалы:
Полулитровые или литровые банки для консервирования Микропористые фильтры, подходящие по размеру к горлышкам банок (из микологических комплектов или изготовленные самостоятельно)
Алюминиевая фольга
Сетчатые мешочки для процеживания краски (есть в хозяйственном или строительном магазине)
Приготовление зерна
Отмерьте одну банку зерна на каждые три банки будущего субстрата и засыпьте зерно в малярный мешочек, но не больше половины его объема. Если нужно, заполните больше мешочков, только не забывайте, что за один раз можно сварить только то количество мешочков, которое поместится в скороварке. Завяжите мешочек шнурком, поместите его в кастрюлю или на дно скороварки (крышку пока не закрывайте), добавьте воды, чтобы только-только покрыть зерно и варите в течение 30 минут. Затем перенесите мешочек в раковину и промойте холодной водой в течение нескольких минут. Промывка способствует удалению вываренного крахмала, так что зерно не будет слипаться.
Дайте воде стечь в течение нескольких минут. Пока вода стекает, вставьте фильтры в кольца, которые будут их фиксировать на горлышках банок . Фильтры можно приобрести у поставщиков (см. ссылки в конце статьи) или вырезать по размеру горлышка из подходящей материи, например из плотного и жесткого полиэстера (курточная ткань). Вместо фильтра можно попробовать использовать диск, который идет с фиксирующим кольцом, перевернув его для обеспечения некоторой циркуляции воздуха. Однако, фильтрующие качества такого метода остаются под вопросом, а риск заражения заметно возрастает. Если вы собираетесь заниматься грибоводством в течение длительного времени, стоит потратить определенную сумму на приобретение многоразовых фильтров.
Приготовление/стерилизация
Развяжите мешочек и заполните зерном банки. Банки должны быть заполнены наполовину или на две трети. Установите на горлышки банок крышки с фильтрами, но не очень плотно. Скороварки обычно идут с сетками, которые не дают банкам касаться дна. Добавьте в скороварку воды, чтобы она почти доходила до банок, когда они стоят на сетке. (воды должно быть по крайней мере сантиметров пять).
Поставьте банки в скороварку. Внимательно изучите инструкции производителя скороварки, а особенно информацию, относящуюся к ее безопасной эксплуатации. Дождитесь, пока давление в скороварке поднимется до 1 атм. (121 град. Цельсия) и поддерживайте это давление в течение двух с половиной часов. Выключите газ и дайте скороварке остыть в течение 30 минут. Осторожно извлеките банки из скороварки, используя чистые кухонные варежки, если банки еще слишком горячие. Закройте крышки на банках плотнее и оберните их алюминиевой фольгой. Сильно встряхните банки, чтобы удостовериться, что зерно не слиплось и не сделалось комом. Хранить банки до использования нужно в чистом, свободном от пыли месте.
Добавки к зерну
Для некоторые сортов грибов кислотность субстрата, которая выражается в pH, может влиять на показатели роста. Кислотность может быть оптимизирована путем добавления 1 столовой ложки молотого известняка (CaCO3) к 4.5 литрам воды и использования в дальнейшем этой смеси в качестве добавки к зерну. Известняк можно купить в садово-огородном отделе (он иногда называется «сельскохозяйственный известняк»). Вид Agaricus bisporous (шампиньон, или Портобелло) является хорошим примером того, когда рост мицелия улучшается после добавления к зерну известняка. Более полная информация по требованиям к субстрату для различных видов грибов имеется в специальных изданиях, например в книге «Грибовод» Пола Стэймета (Paul Stamet, “The Mushroom Cultivator”, см. «Источники» в конце статьи).
Перенос агаровой культуры на зерно в бутылках или банках Одной пробирки хватит для инокуляции нескольких банок или бутылок с зерном, потому что на каждую банку уходит только крошечный кусочек мицелия. Техника инокуляции, вообще говоря, должна быть стерильной, как в описано в предыдущем разделе. Еще раз повторюсь, все материалы и принадлежности должны быть расположены на рабочем месте до начала работы. Сперва потренируйтесь на пустых банках и пробирках, пока не почувствуете, что можете делать все быстро и удобно.
Для работы с бутылками или банками хорошо использовать специальную подставку, на которой бутылки или банки располагаются в горизонтальном положении, пока производятся переносы. Это освобождает руки для открывания и снятия крышек. Подставку можно без труда сделать из молочного тетрапака, вырезав в нем выемки подходящего размера. После того, как вы сняли колпачок с пробирки или крышку с бутылки или банки, используйте инокуляционную петлю (Рис. 4) для того, чтобы вырезать небольшой кусочек мицелия из агара. Поместите мицелий внутрь банки и закройте крышку на банке и колпачок на пробирке. Если нужно, постучите по банке, чтобы мицелий оказался на зерне. Обязательно стерилизуйте инокуляционную петлю в пламени после каждой инокуляции и не забывайте держать пробирку и банку в горизонтальном положении в течение всего процесса, чтобы исключить попадание на субстрат частиц из воздуха.
После того, как банки инокулированы, поставьте на них перманентным маркером дату или наклейте ярлычки из липкой бумаги. Можно также поставить на контейнере стрелочку, указывающую на место, куда был помещен мицелий, потому что при дальнейшем наблюдении порою трудно найти это место, пока мицелий не начал расти. После того, как начался рост мицелия на зерне, периодически встряхивайте контейнер, чтобы ускорить колонизацию и предотвратить слипание зерна в плотную массу. Мицелий вешенки или шампиньона хорошо растет при комнатной температуре. После окончательной колонизации культуры мицелий можно хранить в холодильнике, чтобы сохранить его жизнеспособность.
Шаг III: Основной субстрат и стимуляция плодоношения
Третья и заключительная фаза культивирования грибов заключается в том, чтобы еще больше размножить мицелий (но обычно не на зерне, а на другой среде) и обеспечить такие условия окружающей среды, при которых произойдет стимуляция плодоношения. Субстраты для плодоношения могут отличаться по составу в зависимости от вида выращиваемого гриба. В этой статье мы рассмотрим требования к субстрату и условиям, необходимым для плодоношения вида Pleurotus (устричные грибы, вешенка). Вешенки являются превосходным выбором для начинающего грибовода, потому что мицелий вешенки растет быстро, ведет себя агрессивно по отношению к нежелательным организмам и не требует создания каких-то особых условий для успешного плодоношения. Нужно отметить, что сорта вешенки отличаются по цвету. Среди имеющихся в продаже сортов имеются вешенки белого, коричневого, розового и желтого цветов.
Субстраты для плодоношения
Вешенка может плодоносить на различных материалах, таких как древесина твердых пород (чурки), солома, опилки, кукурузные кочерыжки, измельченные газеты и т.д. Избегайте использования опилок или стружек от древесины хвойных пород, таких как сосна, потому что они подавляют рост мицелия вешенки. Субстрат для выращивания вешенки можно купить в сельскохозяйственных и животноводческих магазинах. В продаже могут быть тюки соломы или древесные стружки для подстилки. Пилорамы, на которых пилят древесину твердых пород и деревообрабатывающие компании тоже являются хорошим источником сырья для приготовления субстрата. Проявите наблюдательность и смекалку.
Приготовление субстрата
Вешенка может быть выращена на пастеризованном субстрате, который проще в приготовлении и дешевле, чем стерильная среда. Целью пастеризации является выщелачивание растворимых компонентов, которые могут способствовать развитию конкурирующих грибков, а также уничтожение насекомых-паразитов. Простой способ приготовления пастеризованной рубленой соломы или аналогичного материала - это насыщение кипящей водой в течение 30 минут а затем отцеживание и охлаждение. Влажность субстрата считается подходящей, если при сжатии субстрата в руке вода только-только проступает в виде капелек между пальцами.
Для использовании бОльших количеств субстрата или деревянных чурок , на улице можно использовать 200-литровую бочку, разогревая ее подходящей газовой горелкой. Наполненную субстратом и водой бочку можно довести до кипения за 30-45 минут. Затем субстрат нужно отцедить (можно сделать сито из проволоки и поместить на дно бочки перед загрузкой субстрата). Альтернативный способ - наполнить наполовину субстратом малярные сеточки, завязать их и заполнить ими бочку на ½ или ¾ объема, добавить води и вскипятить, как указано выше.
Количество плодоносящего субстрата и контейнеры
Плодоношение может происходить при любом количестве субстрата, но для начинающих грибоводов было бы правильным начать с небольших количеств, для того, чтобы отточить свою технику. Двухлитровый тетрапак из-под молока с помещенным внутрь полиэтиленовым пакетом - вот подходящий размер для первых экспериментов. Другой вариант - купить в хозяйственном магазине пластиковые рукава или пищевые контейнеры с крышками. Они недорогие, прочные, транспортабельные и через них хорошо видно процесс разрастания культуры.
Обогащение субстрата
Урожайность может быть повышена за счет добавок, богатых питательными веществами, таких как зерна кофе, целлюлозная мука, рисовые отруби и т.д. Тем не менее, добавки следует использовать с известной осторожностью, поскольку их применение увеличивает риск заражения. В большинстве случаев подобные материалы добавляют после первоначального зарастания культуры мицелием, т.е. после того, как субстрат полностью колонизирован и опасность заражения меньше. Попробуйте с помощью палочек для еды сделать в колонизированном мицелии небольшие туннели (сверху вниз) а затем засыпьте в них пастеризованную добавку (например с помощью воронки). Такой способ поможет мицелию быстро освоить добавку, не позволяя другим организмам сделать это быстрее.
Размножение посадочного мицелия
Чем больше зернового мицелия использовано для инокуляции субстрата, тем скорее он будет колонизирован, следовательно, вероятность заражения при этом меньше, а плодоношение начнется быстрее. В связи с тем, что пастеризованные культуры могут подвергнуться заражению плесенью и бактериями, для первого раза лучше явно перебрать с количеством мицелия для инокуляции. Неплохо будет, если на трехлитровый объем субстрата вы добавите чашку зернового мицелия.
Перед тем, как открыть бутылку или банку, хорошенько перетрясите зерно. Рассыпьте зерновой мицелий по поверхности субстрата или перемешайте чистыми руками субстрат и зерно на противне, а затем наполните полученной смесью пластиковый пакет или контейнер. Завяжите пакет свободным узлом или просто подверните открытую часть. Если на контейнере есть крышка, то через несколько дней надо будет проколоть в ней небольшие отверстия для притока свежего воздуха. Положите пакет или контейнер в место, свободное от пыли и может быть даже накройте сверху бумагой или пленкой, чтобы вместе с пылью не занести на субстрат заражение.
Большинство штаммов вешенки, особенно те, которые используются на промышленном уровне, растут быстро при температуре от 18 до 24 град. Цельсия и не требуют понижения температуры для инициации плодоношения. В течение разрастания мицелия культура должна содержаться в среде с повышенной влажностью и минимальной циркуляцией воздуха. Мицелий вешенки может выжить при довольно высоком уровне содержания углекислого газа (CO2). Субстрат в двухлитровом тетрапаке из-под молока при температуре 21-24 град. Цельсия должен полностью зарасти мицелием примерно за три недели.
Плодоношение
В обычных условиях культура не будет плодоносить до тех пор, пока субстрат не колонизирован полностью. Небольшие образования или коралловидные выросты на поверхности говорят о том, что культура начала плодоносить. Несмотря на то, что понижение температуры субстрата для плодоношения обычно не требуется, небольшое количество рассеянного света считается важным фактором.
Для образования плодовых тел нормальной формы требуется больше свежего воздуха, чем при росте мицелия, но обеспечение высокой влажности также является необходимым. Чтобы выполнить это условие, культуру обычно помещают в пластиковый пакет с отверстиями для аэрации или в коробку (террариум), в которой имеется лоток с увлажненным гравием. В случае использования контейнера с крышкой, после появления грибных зародышей, т.е. когда начинают формироваться крошечные скопления, напоминающие миниатюрные грибы, крышка может быть снята, а для поддержания влажности потребуются упомянутые выше пакеты с отверстиями или террариум. Для того, чтобы из грибного зародыша вырос полноценный гриб вешенки, может потребоваться неделя, в зависимости от температуры и влажности. Если края шляпки гриба начали заворачиваться кверху, это означает, что гриб достиг наибольшей зрелости. К этому времени нужно решить, что делать с грибом дальше - использовать его для дальнейшего разведения или съесть за ужином.(См. Рис. 6)
Рис. 6 -- Успешное плодоношение
Что делать дальше
После того, как вы освоите рассмотренные методики и достигните успехов в выращивании легко культивируемых сортов, таких как вешенка, вам, возможно, захочется попробовать свои силы на других видах. Может быть, ваши домочадцы даже попросят сделать дома уголок, где были бы собраны различные плодоносящие сорта, разрастающиеся культуры и прочие атрибуты грибоводства. Может быть, вы продолжите наступление на контаминацию и приобретете ламинарный бокс или даже оборудуете лабораторию в неиспользуемой комнате или ванной. А может быть, вы захотите исследовать возможность натурализации некоторых видов в саду или где-нибудь еще на улице.
Первым делом, если в вашем районе проводятся обучение и практические занятия по культивированию, я очень рекомендую записаться на них. Чем больше вы будете открыты к изучению новых техник и чем больше будете общаться с грибоводами на различных уровнях, тем больше у вас будет успехов и достижений. Ваше местное микологическое общество может предлагать курсы. Возможно, даже существует комитет по культивированию или по крайней мере список лиц, заинтересованных в культивировании, с которыми вы могли бы обмениваться идеями и помогать друг другу полезной информацией и советами.
Если в вашей местности не проводятся занятия, попробуйте связаться с опытными микологами, которые вероятно с радостью взялись бы за обучение, если бы аудитория проявляла соответствующий интерес. Или организуйте комитет по культивированию самостоятельно! Сейчас, если вы еще этого не сделали, я рекомендую вам приобрести какое-нибудь хорошее руководство по грибоводству, например «Грибовод» (The Mushroom Cultivator), авторы Paul Stamets and J.S. Chilton (см. «Источники»»). Вы можете также заказать некоторые грибные культуры по почте, например у таких поставщиков, как Fungi Perfecti или Western Biologicals (опять же, см. «Источники») и эти культуры будут отосланы к вам вместе с соответствующими инструкциями. Без сомнения, когда вы хорошо освоите рассмотренные техники культивирования, вы можете начать собственные эксперименты с видами, которые можно найти в своей местности или в магазине, размножая их вегетативным путем или даже освоив продвинутую методику работы со спорами. Познайте волнующее переживание того, как крошечные зародыши превращаются в восхитительные зрелые грибы, выращенные из культуры, созданной собственными руками, и тогда что-то решительно изменится в вас. Вот здесь-то и начинается настоящее путешествие в мир грибов!
На блоке текст не весь показывется .
Выращивание грибов. Советы начинающим
Мудрость, рожденная в простом
Автор: Terri Marie Beauséjour
Copyright 1999, all rights reserved.
Если перспектива выращивания собственных грибов окрылила вас, то первые же попытки, скорее всего, повергли в уныние в связи со сложностью и потенциальной дороговизной таких вещей, как «стерильные технологии,» «чистые помещения», «ламинарные боксы» и «агаровые питательные среды». А может быть вы, будучи склонны к исследованиям, проделали немалую работу, героически пытаясь отделить чистые культуры мицелия, и все лишь для того, чтобы увидеть, как нежный белый мицелий расцветает всеми цветами радуги, благодаря пушистым спорам плесени, или превращается в лоснящиеся лужицы жидкости в связи с бактериальным заражением. Мужайтесь, вы не одиноки!
Являясь председателем Комитета по культивированию Микологического общества Сан-Франциско (MSSF), я общаюсь с многими людьми, посвятившими себя культивированию грибов, и они подтверждают, что указанные выше сложности - это две основные преграды, тормозящие прогресс в грибоводстве. Признавая необходимость в оказании помощи по преодолению указанных проблем, Комитет по культивированию MSSF периодически организовывал лекции и семинары, посвященные вопросам выращивания грибов. Я весьма признательна преподавателям, принимавшим участие в тех семинарах за методики, которые я предлагаю в этой статье.
Цели и задачи
Наиболее разумная цель, конечно, начать с одного плодового тела гриба и вырастить из него целый букет грибов. Грибы могут быть размножены двумя способами—спорами (это аналог семян у растений) или путем воспроизведения ткани, извлеченной из плодового тела (аналогично вегетативному размножению растений через прививание). Для начала мы будем использовать второй способ, который проще и дает начинающему грибоводу лучшие шансы на успех.
Задачи у нас вот какие:
Начать со стерильного фрагмента грибной ткани и перенести его на питательную среду (на самом деле, этот процесс будет последовательно проводиться в три этапа на различных средах, как вы увидите дальше) Из основной культуры создать несколько ее образцов Избежать заражения культуры И, наконец, создать среду и условия, в которых грибной организм начнет плодоношение.
Ваша культура должна пройти через три отдельные фазы (См. Рис. 1):
Стерильная культура на агаровой среде
Стерильная культура на зерне, известная также как «зерновой мицелий»
Плодоношение на пастеризованном субстрате
Пусть слово «стерильность», наряду с новыми терминами, не смущает и не останавливает вас. Да, потенциальные источники заражения существуют повсеместно в окружающей среде: в наших домах, даже в чистых комнатах и лабораториях. Цель состоит в том, чтобы предотвратить их попадание в разводимую культуру и исключить «борьбу» за питательную среду, оставив исключительной право ее использования нашим грибным культурам. Обладая определенной аккуратностью и после небольшой тренировки с использованием простых методик, этот процесс может быть успешно освоен каждым. В общем, дышите глубже и читайте о деталях процесса дальше, шаг за шагом.
Рис. 1 -- Это действительно просто! (Рисунки выполнены T.
Beauséjour)
Комментарий к тексту на рисунке (по часовой стрелке): Sterile Tissue Culture - стерильная ткань гриба,Inоculation in Grain - инокуляция зерна, Incubation of Spawn - рост зернового мицелия,Transfer to Final Substrate - перенос на основной субстрат, Mushrooms Fruiting in Substrate - плодоношение грибов на субстрате.
Шаг I: Подготовка агара и стерильной культуры
Подготовка агара: Первым шагом является подготовка агаровой питательной среды. Произведенный из морских водорослей агар, в совокупности с добавочными ингредиентами, часто используется для первоначального разведения и дальнейшей изоляции культур. Микробиологи приспосабливают агаровую среду для селекционного выращивания грибов путем добавления различных питательных веществ, таких как минералы, антибиотиков и т.д. Агаровая среда обладает и тем ценным качеством, что микроорганизмы, вызывающие заражение, без труда обнаруживаются на поверхности среды и таким образом, они могут быть уничтожены на самых ранних стадиях процесса роста.
Для разведения грибного мицелия могут быть использованы несколько типов агаровых сред. Наиболее часто используют картофельный агар (Potato Dextrose Agar, PDA) и мальтодекстриновый агар (Malt Dextrose Agar, MDA). Готовые смеси промышленного изготовления доступны в самых различных магазинах. Правда, они могут оказаться несколько дороже, чем при самостоятельном приготовлении агара, но если позволяют средства и не хочется тратить драгоценное время, то готовые смеси - это хороший выбор. Для тех, кто привык все делать своими руками, ниже приводятся два способа приготовления картофельного агара (PDA). Первый способ, уже не раз мною опробованный, основан на методике, описанной в издании The Mushroom Cultivator (“Грибовод”), авторы Paul Stamets и J.S. Chilton. Второй способ с успехом используется и пропагандируется грибоводнической группой MSSF. Попробуйте первый или второй способ, или же оцените оба. Вскоре вы сможете определиться, какой из способов лучше подходит для вас, а может быть, на основе полученного опыта вы придумаете свой способ, который со временем несомненно преобразуется во что-то еще. Процедура приготовления выглядит так же, как описание рецепта из поваренной книги.
Материалы, необходимые для обоих методов
Хлопчатобумажный бинт (продается в аптеках)
Алюминиевая фольга
Пробирки с накручиваемыми колпачками для автоклавной обработки - можно найти у снабженцев по медицинскому оборудованию или попросить в лаборатории. Лаборатории иногда избавляются от больших количеств таких пробирок. Поищите, поспрашивайте.
Небольшая воронка для заполнения пробирок
Мерные чашки
Скороварка
Две литровые бутылки или колбы с узким горлышком. Первым делом, несколько слов о скороварке. Скороварка - это, возможно, наиболее дорогостоящая вещь из всего инвентаря грибовода. Если она у вас уже имеется и ее размеры позволяют разместить внутри бутылки или банки, то можно считать, что вы полностью укомплектованы. Если нет, то новая скороварка обойдется вам приблизительно в $75 - $250, в зависимости от размера и места покупки. Скороварки продаются во многих хозяйственных магазинах, торгующих кухонной утварью.
Если у вас сложности с бюджетом, можно пойти по экономному пути и поискать скороварку на распродажах или на барахолке. Можно найти практически новую скороварку за $15 - 35. Постарайтесь найти скороварку с манометром, а не просто с клапаном-колпачком и без указателя давления. В любом случае, какую бы скороварку вы ни выбрали, очень важно соблюдать все правила безопасной эксплуатации, определенные производителем.
Картофельный агар. Метод №1
(Для приготовления приблизительно 1 литра среды)
Необходимые материалы:
300 грамм картофеля
20 грамм агара (поищите в организациях по снабжению медицинских лабораторий, магазинах здорового питания или на азиатских продовольственных рынках)
10 грамм декстрозы или другого сахара 2 грамма пивных дрожжей (необязательно)
Сварите картофель в 1 литре воды в течение 1 часа. Откиньте картофель, сохранив отвар. Разомните картофель, добавьте масла, соли и перца и съешьте. Сметана, лучок и другие приправы - по вкусу :). После того, как мы заморили червячка картофельным пюре, возьмем картофельный отвар, агар, сахар, дрожжи (необязательно) и хорошенько все смешаем в кастрюле. Для этой цели хорошо подходит веничек для взбивания, но взбивать не следует, нужно просто перемешивать. Наполните полученной смесью бутылки или колбы. Заполняйте емкости только на половину или три четверти объема. Закройте горлышки бутылок или колб хлопчатобумажными тампонами и оберните алюминиевой фольгой. Залейте в скороварку воду, чтобы она закрывала дно слоем в 1.5 см., поместите внутрь скороварки сетку, на которую поставьте бутылки или колбы. Поставьте на скороварку крышку и защелкните ее должным образом. Включите плиту и подождите, пока из скороварки не пойдет пар. После вентиляции в течение нескольких минут, закройте клапан (в соответствии с инструкцией к конкретной скороварке).
Кипятите бутылки под давлением 1 атм. (121 градус по Цельсию) в течение 15 минут. Не позволяйте температуре подниматься выше 121 градуса даже на самое короткое время, иначе произойдет карамелизация среды и она придет в негодность.
Через 15 минут выключите газ и дайте скороварке медленно остыть (в течение примерно 45 минут). Тем временем, снимите с пробирок колпачки, установите пробирки на штативе или в чистых консервных банках и поставьте штатив или консервные банки на чистую рабочую поверхность в месте, свободном от пыли. Когда бутылки с питательной средой остынут и их можно будет брать с помощью чистого полотенца или варежек для микроволновой печи, извлеките их из скороварки и перенесите к пробиркам. Круговыми движениями слегка перемешайте питательную среду, а затем удалите фольгу и хлопчатобумажные тампоны. Используя воронку, заполните пробирки примерно на одну треть. Наверните свободно колпачки на пробирки, поместите банки с пробирками в скороварку (убрав из скороварки лишнюю воду, если нужно), дождитесь увеличения давления до 1 атм. (121 градус по Цельсию) и оставьте вариться на 30 минут. После этого снова дайте скороварке постепенно остыть, чтобы давление снизилось до нормального.
Извлеките пробирки и закрутите колпачки плотнее. Закрепите пробирки каким-нибудь способом в наклоненном положении, чтобы поверхность агаровой среды приобрела «скошенный» вид, предоставляя максимальную поверхность для дальнейшего роста мицелия. (Пробирки, приготовленные таким образом, часто называют «косым агаром»).
По мере того, как среда охлаждается, она будет застывать в виде желе и, в конечном счете, пробирки можно будет вернуть в вертикальное положение; агаровая среда при этом останется на месте. Если пробирки не предполагается использовать сразу, их можно поместить в зип-локи и хранить в холодильнике в течение недель или месяцев. В дальнейшем, перед использованием пробирок из холодильника, необходимо убедиться в отсутствии заражения среды плесенью или бактериями.
Картофельный агар. Метод №2
(получается около литра питательной среды)
Необходимые материалы:
10 унций или 284 грамм картофеля
¾ унции или 21.3 грамм агара
¼ унции или 8 грамм декстрозы - можно заменить столовым сахаром
Шаг 1: Смешивание ингредиентов
Вымойте картофель, но не срезайте кожуру. Порежьте на небольшие кусочки.
Сварите картофель до хорошей готовности в полулитре воды. Процедите и сохраните отвар. Картофель можно выбросить или использовать в пищу.
Смешайте декстрозу/сахар, картофельный отвар и агар в металлической или термостойкой стеклянной чашке. Добавьте воды до литра.
Шаг 2: Растворение агара
Поместите агаровую смесь в скороварку. Накройте чашку алюминиевой фольгой.
Дождитесь, пока давление в скороварке поднимется до 1 атм. Варка в течение 20 минут приведет к полному растворению агара. Оставьте скороварку для медленного остывания.
Шаг 3: Заливка агара в пробирки
С помощью варежек для микроволновки и мерного стакана заполните каждую пробирку примерно на треть объема. Вместо штатива для пробирок могут быть использованы консервные банке. Оставшийся агар можно сохранить в бутылке, закрытой хлопчатобумажным или синтепоновым тампоном, а стерилизовать позже, вместе с пробирками. Если пробирки достать не удалось, вместо них можно использовать небольшие бутылочки. Если пробирки закрываются пластиковыми колпачками, то они должны закрываться неплотно, чтобы давление в процессе стерилизации выравнивалось. Хлопчатобумажные или синтепоновые тампоны помогают избежать этой проблемы, но при этом потребуется накрыть пробирки алюминиевой фольгой, чтобы капли конденсата с крышки остывающей скороварки не попадали на пробки.
Шаг 4: Стерилизация агара
Поместите пробирки/бутылки, содержащие агар, в скороварку и стерилизуйте под давлением 1 атм. в течение 25 минут. В эти 25 минут не входит время, необходимое для достижения нужного давления в скороварке. Дайте скороварке медленно остыть. Быстрый сброс давления может привести к интенсивному вскипанию агара в пробирках, выплёскиванию его через тампоны и колпачки пробки и к возможному заражению.
Шаг 5: Наклонное расположение пробирок
Протрите 10% раствором хлорсодержащего отбеливателя стол, на котором будут расположены в наклоненном положении пробирки. Работу следует производить в помещении без сквозняков. Надев кухонные варежки, расположите горячие пробирки на столе в наклоненном положении, положив пробирки одним краем на подходящий предмет. Предварительно стоит поэкспериментировать с деревянными брусочками или стопкой журналов для того, чтобы подобрать нужный угол наклона.
После желатинизации агара закройте плотнее колпачки. Готовые пробирки или бутылки следует хранить в прохладном, свободном от пыли месте. Покрытие из алюминиевой фольги предотвратит возможность заражения пробирок до их использования.
Методики стерильной работы с грибной культурой
После того, как агаровые пробирки остыли, самое время заняться разведением грибной культуры.
Необходимые материалы:
Скальпель или очень острый нож с тонким лезвием
Спиртовка или пропановая горелка с баллончиком, зажигалка или спички Металлические консервные банки или штативы для пробирок с косым агаром и одна банка и штатив для хранения готовых пробирок Держатель для скальпеля или ножа (см. ниже примеры для самостоятельного изготовления)
Микропористый бинт (такой, как в аптечках первой помощи, продается в аптеках) или обычный бинт (более дешевый вариант) Распылитель с раствором из 10% хлорсодержащего отбеливателя и 90% воды (необязательно)
Свежее, чистое плодовое тело гриба или грибов (для начинающих микологов очень рекомендуется использовать вешенку)
Выберите место в доме, офисе или лаборатории, свободное от пыли и возможных источников плесени или грибков. Работы производите на устойчивом столе или стойке, предварительно вымыв поверхность теплой мыльной водой и вытерев насухо (для дополнительной защиты можно также обработать поверхность аэрозолем из 10% раствора отбеливателя и вытереть затем насухо чистой тряпкой или бумажной салфеткой.) Закройте все окна, чтобы свести к минимуму циркуляцию воздуха (в идеале, постарайтесь перенести работы по культивированию на утренние часы, пока воздух чист от пыли, поднимаемой в воздух активными домочадцами). Разложите все материалы в готовом для работы виде и в пределах удобной досягаемости. Поместите агаровые пробирки в металлическую консервную банку (банки) или штативы. Зажгите свет или включите светильник. Тщательно простерилизуйте лезвие скальпеля в пламени и положите скальпель на подставку. Подставку можно выгнуть из проволоки (например из старой вешалки), жестяной банки или другого подручного материала. Целью изготовления такой подставки является обеспечение устойчивого положения инструмента, чтобы его лезвие, пока оно не используется, находилось возле пламени во избежание заражения.
Для начала возьмите свежий, чистый гриб. Несмотря на то, что внешняя поверхность грибного тела может содержать бактерии и споры плесени, внутренняя ткань обычно свободна от организмов, вызывающих заражение, если только гриб не перенасыщен водой.
Оторвите или отломите часть гриба (не отрезайте с помощью ножа, потому что лезвие занесет инфекцию с внешних поверхностей). Положите гриб на стол чистой поверхностью вверх (эта поверхность не должна касаться стола). Цель тут состоит в том, чтобы получить чистую, открытую поверхность, от которой может быть отделен очень небольшой кусочек грибной ткани, а сам кусочек оставался бы, насколько это возможно, нетронутым, пока не будет помещен в пробирку.
Сейчас вам нужно расположить рабочие материалы так, чтобы пробирка, пока вы помещаете в нее кусочек грибной ткани, как можно меньшее время оставалась открытой. Для того, чтобы вероятность заражения была минимальна, недопустимо класть пробирку или пробку на стол. Этот момент представляет некоторую сложность. Будет полезно сперва попрактиковаться с пустой пробиркой перед тем, как использовать «боевую» пробирку с агаром и грибную ткань. Дальнейшие указания подразумевают, что вы - правша. Если нет, то все придется делать в зеркальном порядке. Держите левую руку так, чтобы большой палец смотрел вниз, а остальные пальцы были расположены горизонтально. Поместите пробирку между средним и безымянным пальцами левой руки так, чтобы безымянный палец был сверху, средний - снизу пробирки, а пробка смотрела в направлении от руки. Пробирку следует держать только в горизонтальном положении, чтобы частицы из воздуха не попадали в горлышко пробирки. Скошенная поверхность агара, на которую вы будете помещать грибную ткань, должна смотреть вверх. Осторожно снимите пробку с пробирки и поместите ее между безымянным пальцем и мизинцем так, чтобы мизинец был сверху, а безымянный палец - снизу. (См. Рис. 2).
Рис.. 2 -- Немного мудрёно, но практика помогает
Используя свободные указательный и большой палец левой руки, крепко возьмите кусочек гриба с чистой поверхностью, смотрящей вверх или вбок. Правой рукой уверенно возьмите скальпель, держа его за ручку наподобие карандаша. Кончиком лезвия отрежьте от чистой грибной ткани очень маленький кусочек треугольной формы. Осторожно отделите грибную ткань и быстро поместите внутрь пробирки на край горлышка. Если нужно, стряхните кусочек гриба со скальпеля постукивающими движениями. Положите скальпель на место и быстро закройте пробирку пробкой. Теперь несколько раз постукайте нижней частью пробирки о тыльную сторону ладони для того, чтобы переместить грибную ткань на агаровую поверхность (См. Рис. 3). Поставьте пробирку в другую консервную банку, предназначенную для хранения инокулированных пробирок.
Рис. 3 -- Перемещаем с помощью постукивания
Комментарий к тексту на рисунке: Move to Here by Tapping the Tube
against the Heel of the Hand - переместите в это место путем
постукивания пробиркой по тыльной стороне ладони, Insert Here -
поместите сюда
Есть! Теперь у нас имеются очень хорошие шансы на то, что полученная культура гриба является чистой.
Проделайте то же самое с оставшимися пробирками и грибным материалом. Изготовление нескольких пробирок с каждого образца гриба важно по той причине, что даже при самой аккуратной работе иногда случаются заражения. После проведения инокуляции очередной пробирки простерилизуйте заново скальпель или лезвие ножа на пламени и оторвите свежий кусочек гриба, чтобы открыть другой участок чистой ткани грибного тела. После того, как работа с пробирками завершена, закрутите плотнее колпачки и обверните на каждой пробирке место, на котором колпачок граничит со стеклом, при помощи микропористой ленты. Микропористая лента позволит культуре «дышать», но предотвратит попадание инородных организмов через горлышко пробирки. Пометьте пробирки перманентным маркером или небольшими наклейками , указав дату и информацию о содержимом. Наконец, поместите инокулированные пробирки в темное и прохладное место (наилучшая температура 13 - 21 градусов по Цельсию). Через некоторое время (от нескольких дней до недели) грибная ткань станет пушистой, что связано с началом роста мицелия. Через несколько недель мицелий полностью покроет поверхность агара.
Если показалась плесень (ее легко распознать по спорам зеленого, черного или другого цвета) или бактериальное заражение (обычно окрашенная лоснящаяся субстанция ), то эта культура подлежит немедленному уничтожению, а пробирки и пробки следует вымыть в горячей мыльной воде. По возможности, пробирки с зараженной культурой нужно освобождать в отдельном месте, подальше от здоровых культур. Например, выйдите на улицу и выбросите содержимое прямо в мусорный бак. Для освобождения пробирки от питательной среды можно использовать китайскую палочку для еды; среду можно извлечь сразу целым кусочком или по частям. Шаг II: Методики стерильного переноса и зерновой мицелий Стерильный перенос на ряд агаровых пробирок Полученная агаровая пробирка, содержащая грибной мицелий, является «мастер-культурой» (маточной культурой). Если есть желание размножить культуру для того, чтобы иметь ее запас или чтобы поделиться с другими грибоводами, следует перенести грибной материал из одной пробирки в несколько других пробирок. Эту работу можно выполнить, используя точно такую же методику первоначального стерильного переноса, как это было описано выше.
Картофельный агар. Метод №2
(получается около литра питательной среды)
Необходимые материалы:
10 унций или 284 грамм картофеля
¾ унции или 21.3 грамм агара
¼ унции или 8 грамм декстрозы - можно заменить столовым сахаром
Шаг 1: Смешивание ингредиентов
Вымойте картофель, но не срезайте кожуру. Порежьте на небольшие кусочки.
Сварите картофель до хорошей готовности в полулитре воды. Процедите и сохраните отвар. Картофель можно выбросить или использовать в пищу.
Смешайте декстрозу/сахар, картофельный отвар и агар в металлической или термостойкой стеклянной чашке. Добавьте воды до литра.
Шаг 2: Растворение агара
Поместите агаровую смесь в скороварку. Накройте чашку алюминиевой фольгой.
Дождитесь, пока давление в скороварке поднимется до 1 атм. Варка в течение 20 минут приведет к полному растворению агара. Оставьте скороварку для медленного остывания.
Шаг 3: Заливка агара в пробирки
С помощью варежек для микроволновки и мерного стакана заполните каждую пробирку примерно на треть объема. Вместо штатива для пробирок могут быть использованы консервные банке. Оставшийся агар можно сохранить в бутылке, закрытой хлопчатобумажным или синтепоновым тампоном, а стерилизовать позже, вместе с пробирками. Если пробирки достать не удалось, вместо них можно использовать небольшие бутылочки. Если пробирки закрываются пластиковыми колпачками, то они должны закрываться неплотно, чтобы давление в процессе стерилизации выравнивалось. Хлопчатобумажные или синтепоновые тампоны помогают избежать этой проблемы, но при этом потребуется накрыть пробирки алюминиевой фольгой, чтобы капли конденсата с крышки остывающей скороварки не попадали на пробки.
Шаг 4: Стерилизация агара
Поместите пробирки/бутылки, содержащие агар, в скороварку и стерилизуйте под давлением 1 атм. в течение 25 минут. В эти 25 минут не входит время, необходимое для достижения нужного давления в скороварке. Дайте скороварке медленно остыть. Быстрый сброс давления может привести к интенсивному вскипанию агара в пробирках, выплёскиванию его через тампоны и колпачки пробки и к возможному заражению.
Шаг 5: Наклонное расположение пробирок
Протрите 10% раствором хлорсодержащего отбеливателя стол, на котором будут расположены в наклоненном положении пробирки. Работу следует производить в помещении без сквозняков. Надев кухонные варежки, расположите горячие пробирки на столе в наклоненном положении, положив пробирки одним краем на подходящий предмет. Предварительно стоит поэкспериментировать с деревянными брусочками или стопкой журналов для того, чтобы подобрать нужный угол наклона.
После желатинизации агара закройте плотнее колпачки. Готовые пробирки или бутылки следует хранить в прохладном, свободном от пыли месте. Покрытие из алюминиевой фольги предотвратит возможность заражения пробирок до их использования.
Методики стерильной работы с грибной культурой
После того, как агаровые пробирки остыли, самое время заняться разведением грибной культуры.
Необходимые материалы:
Скальпель или очень острый нож с тонким лезвием
Спиртовка или пропановая горелка с баллончиком, зажигалка или спички Металлические консервные банки или штативы для пробирок с косым агаром и одна банка и штатив для хранения готовых пробирок Держатель для скальпеля или ножа (см. ниже примеры для самостоятельного изготовления)
Микропористый бинт (такой, как в аптечках первой помощи, продается в аптеках) или обычный бинт (более дешевый вариант) Распылитель с раствором из 10% хлорсодержащего отбеливателя и 90% воды (необязательно)
Свежее, чистое плодовое тело гриба или грибов (для начинающих микологов очень рекомендуется использовать вешенку)
Выберите место в доме, офисе или лаборатории, свободное от пыли и возможных источников плесени или грибков. Работы производите на устойчивом столе или стойке, предварительно вымыв поверхность теплой мыльной водой и вытерев насухо (для дополнительной защиты можно также обработать поверхность аэрозолем из 10% раствора отбеливателя и вытереть затем насухо чистой тряпкой или бумажной салфеткой.) Закройте все окна, чтобы свести к минимуму циркуляцию воздуха (в идеале, постарайтесь перенести работы по культивированию на утренние часы, пока воздух чист от пыли, поднимаемой в воздух активными домочадцами). Разложите все материалы в готовом для работы виде и в пределах удобной досягаемости. Поместите агаровые пробирки в металлическую консервную банку (банки) или штативы. Зажгите свет или включите светильник. Тщательно простерилизуйте лезвие скальпеля в пламени и положите скальпель на подставку. Подставку можно выгнуть из проволоки (например из старой вешалки), жестяной банки или другого подручного материала. Целью изготовления такой подставки является обеспечение устойчивого положения инструмента, чтобы его лезвие, пока оно не используется, находилось возле пламени во избежание заражения.
Для начала возьмите свежий, чистый гриб. Несмотря на то, что внешняя поверхность грибного тела может содержать бактерии и споры плесени, внутренняя ткань обычно свободна от организмов, вызывающих заражение, если только гриб не перенасыщен водой.
Оторвите или отломите часть гриба (не отрезайте с помощью ножа, потому что лезвие занесет инфекцию с внешних поверхностей). Положите гриб на стол чистой поверхностью вверх (эта поверхность не должна касаться стола). Цель тут состоит в том, чтобы получить чистую, открытую поверхность, от которой может быть отделен очень небольшой кусочек грибной ткани, а сам кусочек оставался бы, насколько это возможно, нетронутым, пока не будет помещен в пробирку.
Сейчас вам нужно расположить рабочие материалы так, чтобы пробирка, пока вы помещаете в нее кусочек грибной ткани, как можно меньшее время оставалась открытой. Для того, чтобы вероятность заражения была минимальна, недопустимо класть пробирку или пробку на стол. Этот момент представляет некоторую сложность. Будет полезно сперва попрактиковаться с пустой пробиркой перед тем, как использовать «боевую» пробирку с агаром и грибную ткань. Дальнейшие указания подразумевают, что вы - правша. Если нет, то все придется делать в зеркальном порядке. Держите левую руку так, чтобы большой палец смотрел вниз, а остальные пальцы были расположены горизонтально. Поместите пробирку между средним и безымянным пальцами левой руки так, чтобы безымянный палец был сверху, средний - снизу пробирки, а пробка смотрела в направлении от руки. Пробирку следует держать только в горизонтальном положении, чтобы частицы из воздуха не попадали в горлышко пробирки. Скошенная поверхность агара, на которую вы будете помещать грибную ткань, должна смотреть вверх. Осторожно снимите пробку с пробирки и поместите ее между безымянным пальцем и мизинцем так, чтобы мизинец был сверху, а безымянный палец - снизу. (См. Рис. 2).
Рис.. 2 -- Немного мудрёно, но практика помогает
Используя свободные указательный и большой палец левой руки, крепко возьмите кусочек гриба с чистой поверхностью, смотрящей вверх или вбок. Правой рукой уверенно возьмите скальпель, держа его за ручку наподобие карандаша. Кончиком лезвия отрежьте от чистой грибной ткани очень маленький кусочек треугольной формы. Осторожно отделите грибную ткань и быстро поместите внутрь пробирки на край горлышка. Если нужно, стряхните кусочек гриба со скальпеля постукивающими движениями. Положите скальпель на место и быстро закройте пробирку пробкой. Теперь несколько раз постукайте нижней частью пробирки о тыльную сторону ладони для того, чтобы переместить грибную ткань на агаровую поверхность (См. Рис. 3). Поставьте пробирку в другую консервную банку, предназначенную для хранения инокулированных пробирок.
Рис. 3 -- Перемещаем с помощью постукивания
Комментарий к тексту на рисунке: Move to Here by Tapping the Tube
against the Heel of the Hand - переместите в это место путем
постукивания пробиркой по тыльной стороне ладони, Insert Here -
поместите сюда
Есть! Теперь у нас имеются очень хорошие шансы на то, что полученная культура гриба является чистой.
Проделайте то же самое с оставшимися пробирками и грибным материалом. Изготовление нескольких пробирок с каждого образца гриба важно по той причине, что даже при самой аккуратной работе иногда случаются заражения. После проведения инокуляции очередной пробирки простерилизуйте заново скальпель или лезвие ножа на пламени и оторвите свежий кусочек гриба, чтобы открыть другой участок чистой ткани грибного тела. После того, как работа с пробирками завершена, закрутите плотнее колпачки и обверните на каждой пробирке место, на котором колпачок граничит со стеклом, при помощи микропористой ленты. Микропористая лента позволит культуре «дышать», но предотвратит попадание инородных организмов через горлышко пробирки. Пометьте пробирки перманентным маркером или небольшими наклейками , указав дату и информацию о содержимом. Наконец, поместите инокулированные пробирки в темное и прохладное место (наилучшая температура 13 - 21 градусов по Цельсию). Через некоторое время (от нескольких дней до недели) грибная ткань станет пушистой, что связано с началом роста мицелия. Через несколько недель мицелий полностью покроет поверхность агара.
Если показалась плесень (ее легко распознать по спорам зеленого, черного или другого цвета) или бактериальное заражение (обычно окрашенная лоснящаяся субстанция ), то эта культура подлежит немедленному уничтожению, а пробирки и пробки следует вымыть в горячей мыльной воде. По возможности, пробирки с зараженной культурой нужно освобождать в отдельном месте, подальше от здоровых культур. Например, выйдите на улицу и выбросите содержимое прямо в мусорный бак. Для освобождения пробирки от питательной среды можно использовать китайскую палочку для еды; среду можно извлечь сразу целым кусочком или по частям. Шаг II: Методики стерильного переноса и зерновой мицелий Стерильный перенос на ряд агаровых пробирок Полученная агаровая пробирка, содержащая грибной мицелий, является «мастер-культурой» (маточной культурой). Если есть желание размножить культуру для того, чтобы иметь ее запас или чтобы поделиться с другими грибоводами, следует перенести грибной материал из одной пробирки в несколько других пробирок. Эту работу можно выполнить, используя точно такую же методику первоначального стерильного переноса, как это было описано выше.
Здравствуйте.
Большие статьи действительно не отображаются на форуме, сделано это для того, чтобы лишний раз не "грузить" пользователей. Если хотите разместить большую статью, то в таком случае, можно или размещать статьи в блоге, или присылать ссылку на redaktor@fermer.ru для публикации статьи на портале. В ответном письме Вам будет отправлена ссылка на эту статью у нас на портале.
Которую можно будет публиковать на форуме.
>Все . Никаких банок и автоклавов . Скоро попробую данную систему .
Как же вы без автоклава 150 градусов наберете? :) Даже домашняя скороварка дает примерно 120 градусов.
И второе: очень жаль что в интернете много таких авторов статей и не только в области грибоводства... Рано вам KotyaroO, писать статьи, рано...
Уважаемый Котяро !
Хоть Вы мне и земляк , но истина дороже .
Если Вы утверждаете , что вырастили мицелий на каше - то сопроводите данную информацию фотографиями .
Со стороны если какой человек попадет на данный форум - то у него может сложится мнение , что группа придурков обсуждает всякие бредовые идеи . А я как консультант портала по грибоводству не могу допустить данный расклад .
Откройте свою тему под названием " Бредовые идеи в грибоводстве" и обсуждайте технологию выращивания мицелия на каше .
Если Вы серьезный человек , то попросите у соседки кастрюлю-скороварку - через 7 дней я продолжу тему по выращиванию мицелия . Просто повторите все мои действия .
Смысл автоклава , что в нем повышенное давление и поэтому вода кипит при высокой температуре .
Высокую температуру можно и без автоклава получить . В термошкафу например . Ростер или обычная духовка .
Я же говорил , что применяется термостабильная пленка , которая не плавится до 200 градусов . Данная технология широко применяется украинскими грибоводами и описана на их сайтах .
Через неделю у меня жена уезжает и я все это практически опробую и вам покажу . А то надоело выслушивать истерики , что всю квартиру вареным зерном провонял . 2 варианта получения мицелия , с кастрюлей скороваркой и пленкой .
уж нехотите ли вы сказать что вру я поповоду перловки?да вот уже 2 кг сделал мицелия.и посадил.а сейчас снова развожу мицелий.фото обязательно выложу как только появитса норм.интернет.(15 июня).И вот ненадо меня оскорблять-серьёзным небыл никогда я.Пытаюсь найти нечто среднее в изготовлении мицелия в домашних условиях.через месяц я сниму видеоролик о том как я всё делаю.от начала и доканца.Здесь форум и люди делятся информацией.и тут втему я попадаю.а выдорогой Анатолий только зачастую провоцируете людей на "пустой базар".Обещаю выложить всю информацию о том как я всё делаю.я нехочу быть кем то крутым и закрывать темы а хочу чтобы люди посетившие форум нашли информацию без особого труда.
Хорошо , уважаемый Котяро !
Если Вы выложите информацию по выращиванию мицелия на перловке , то я готов перед Вами извиниться . Хотя здорово в этом сомневаюсь .
Перелопатив сотни страниц информации , я ни разу не встречал упоминания о выращивания мицелия на каше . Смысла не вижу искать какие то экзотические способы выращивания мицелия , типа как на каше .
Также здорово сомневаюсь , что без кварцевой лампы и автоклава Вам удалось получить мицелий .
Мне лично больше нравится овес , по сравнению например с пшеницей . Из-за его чешуек он меньше слипается .
да на перловой крупе.не на каше.и сомнения рассеются если видео вам выложу?
Выкладывай .
Там рядом с поселком Юрья был военный городок под названием Солнечный . Я там в школу начал ходить . Он еще цел ?
P.C. Перловая крупа в вареном виде и есть каша . А так как мицелий развивается по всему объему субстрата , то я сдорово сомневаюсь что внутрь каши будет воздух поступать .
Можно не видео , а обычные фото . У меня модем Билайн зараза - скорость маленькая .
Здравствуйте Анатолий ! Будьте добры подскажите начинающему грибоводу откуда можно по почте наложеным платежом заказать качественный мицелий шампиньона и вешенки.Я живу в Сибири в тайге и мы в основном все заказываем через почту. Хотелось бы узнать надежный источник а то в интернете адресов много - но не лохотрон ли ?
А как вы себе представляете "лохотрон", наложенным платежом? Хотите - забирайте посылку, хотите нет...
Вообще лично заказывал:
stolbovo.ru - приемлемый мицелий <br/>
pokupki24.ru - пару раз прислали с плесенью и не обменяли<br/>
gribpost.ru - заказывал один раз, пришел нормальный
Вообще здесь есть тема про то "Как не имея опыта в глухой деревне..." точно не поню название, дак там есь адреса и сриншоты магазинов + некоторые отзывы.
P.S. вы немного не в той теме написали...
Знаете, по личному опыту, я когда начинал пробовать выращивать мицелий, делал это на рисе... Та еще история :) НО росло, плохо, и не понятно где мицелий, но всеже росло. Любую кашу можно сварить как клестер, но также любая каша может быть рассыпчатой. Это факт! Не думаю что его ктото будет оспаривать. Предлагаю просто поверить наслово котяро, и не продолжать бессмысленный спор. А вы, котяро, просто ради эксперимента, попробуйте на пшенице или на овсе(на овес не советую, сложно промывать, он не тонет). Сравните результат, а там уж какие выводы сделаете, прав ли был Анатолий или нет.
Уважаемый DASES указал адреса Интерне-магазинов . Там можно покупать , но дорого . Первый раз можно попробовать , но потом надо на прямого поставщика выходить . Например , в разделе Статьи - статья о мицелии на палочках . Там координаты .
Лучше брать зерновой мицелий , но в жаркую погоду можно получить типа этого :
Файлы:
314.jpg
В моем посте два магазина(покупки24 и столбово) это реселлеры, там действительно дороговато. Последний (грибпост) продает только мицелий, там не дорого. Еще есть http://wer23sd.narod.ru , они тоже занимаются продажей только мицелия, но в последнее время что то не отвечают. Кстати, Анатолий, может знаете где купить в небольших партиях мицелий Сильван, давно хочу попробовать, но никак не могу найти тех, кто отправит его по почте...
Сильван я и сам хотел купить , но у тех продавцов что я нашел минимальная партия - 32 кг зернового мицелия и отправка по почте . Мне такое количество в настоящий момент - многовато . И зерновой мицелий по почте можно получить в таком виде , что я выше фото выложил .
На следующей неделе продолжу тему по выращиванию зернового мицелия - с палочек в конвертах .
Их сайт :
www
gribnoyogorod
vrn
ru
Бросал их палочки в вареный овес , начал расти мицелий . Но до конца не довел . Через неделю .
... Пос палочкам, я уже вырос, как минимум год назад :) из них я "выжал" все что можно, и на агар садил, и на зерно... Хочу попробовать международного стандарта :) 32 кг? а цена? понимаю что возможно нарушаю правила, в связи с чем ответте мне в личку :)
кстати первые фотографии сделаны на перловке.посмотрите на шапку.также вскором времени выложу фото полностью готового мицелия на перловке.и вот ещё-тема тут не совсем для обсуждения адресов магазинов и всякой "где да как купить какой мицелий".извините.
Мицелий в домашних условиях можно выращивать и выращивают на перловке, гречке, коричневом рисе, на макаронах, на горохе, на лузге.
Просто выращивание на пшенице это пришло из промышленных технологий. Да и пшеница меньше закисает и быстрее обрастает. Например если гречку перемешать то рост мицелия останавливается, перловка подвержена закисанию, рис подвержен аспергилам. В субстрат еще рекомендую добавлять гипс или мел 1-3% это влияет не светочувствительность примордия и на уменьшение СО2 в субстрате, плюс ставится рН барьер от триходермы.
Просто перловку надо варить не как для человека кашу а соотношении с водой 1 к 1, с добавлением 3% перекеси водорода, и последущей промывкой холодной водой, дать стечь воде на дуршлаке 1-2 часа. Вот тогда это не будет кашей.
Молодец , Турбо , все по делу сказал .
Я только покупаю перекись водорода в магазине "Химприбор" в концентрации 70 % и потом развожу его водой- так дешевле .
А после слива воды сушить все равно нужно = закиснет .
Я бы еще попробовал ( по данным одной публикации ) выращивать мицелий на смеси пшеницы и субстрата из соломы . В этом случае :
- лучше доступ воздуха
- лучше потом растет мицелий на соломе
- меньше на таком субстрате плесени растут
И рост мицелия я провожу в пластиковых пакетах . Так гораздо удобнее . Не надо потом из банки выковыривать .
Файлы:
22_13.jpg
На правом мешке с мицелием лицо... Странный мицелий :D
А если серьезно, что за желтоватые пятна? не до конца обросли или оверлей?
Это не желтоватые пятна - это желтоватая вареная пшеница. На которой еще не до конца пророс мицелий .
Выращивание грибов. Советы начинающим
Мудрость, рожденная в простом
Автор: Terri Marie Beauséjour
Copyright 1999, all rights reserved.
Если перспектива выращивания собственных грибов окрылила вас, то первые же попытки, скорее всего, повергли в уныние в связи со сложностью и потенциальной дороговизной таких вещей, как «стерильные технологии,» «чистые помещения», «ламинарные боксы» и «агаровые питательные среды». А может быть вы, будучи склонны к исследованиям, проделали немалую работу, героически пытаясь отделить чистые культуры мицелия, и все лишь для того, чтобы увидеть, как нежный белый мицелий расцветает всеми цветами радуги, благодаря пушистым спорам плесени, или превращается в лоснящиеся лужицы жидкости в связи с бактериальным заражением. Мужайтесь, вы не одиноки!
Являясь председателем Комитета по культивированию Микологического общества Сан-Франциско (MSSF), я общаюсь с многими людьми, посвятившими себя культивированию грибов, и они подтверждают, что указанные выше сложности - это две основные преграды, тормозящие прогресс в грибоводстве. Признавая необходимость в оказании помощи по преодолению указанных проблем, Комитет по культивированию MSSF периодически организовывал лекции и семинары, посвященные вопросам выращивания грибов. Я весьма признательна преподавателям, принимавшим участие в тех семинарах за методики, которые я предлагаю в этой статье.
Цели и задачи
Наиболее разумная цель, конечно, начать с одного плодового тела гриба и вырастить из него целый букет грибов. Грибы могут быть размножены двумя способами—спорами (это аналог семян у растений) или путем воспроизведения ткани, извлеченной из плодового тела (аналогично вегетативному размножению растений через прививание). Для начала мы будем использовать второй способ, который проще и дает начинающему грибоводу лучшие шансы на успех.
Задачи у нас вот какие:
Начать со стерильного фрагмента грибной ткани и перенести его на питательную среду (на самом деле, этот процесс будет последовательно проводиться в три этапа на различных средах, как вы увидите дальше) Из основной культуры создать несколько ее образцов Избежать заражения культуры И, наконец, создать среду и условия, в которых грибной организм начнет плодоношение.
Ваша культура должна пройти через три отдельные фазы (См. Рис. 1):
Стерильная культура на агаровой среде
Стерильная культура на зерне, известная также как «зерновой мицелий»
Плодоношение на пастеризованном субстрате
Пусть слово «стерильность», наряду с новыми терминами, не смущает и не останавливает вас. Да, потенциальные источники заражения существуют повсеместно в окружающей среде: в наших домах, даже в чистых комнатах и лабораториях. Цель состоит в том, чтобы предотвратить их попадание в разводимую культуру и исключить «борьбу» за питательную среду, оставив исключительной право ее использования нашим грибным культурам. Обладая определенной аккуратностью и после небольшой тренировки с использованием простых методик, этот процесс может быть успешно освоен каждым. В общем, дышите глубже и читайте о деталях процесса дальше, шаг за шагом.
Рис. 1 -- Это действительно просто! (Рисунки выполнены T.
Beauséjour)
Комментарий к тексту на рисунке (по часовой стрелке): Sterile Tissue Culture - стерильная ткань гриба,Inоculation in Grain - инокуляция зерна, Incubation of Spawn - рост зернового мицелия,Transfer to Final Substrate - перенос на основной субстрат, Mushrooms Fruiting in Substrate - плодоношение грибов на субстрате.
Шаг I: Подготовка агара и стерильной культуры
Подготовка агара: Первым шагом является подготовка агаровой питательной среды. Произведенный из морских водорослей агар, в совокупности с добавочными ингредиентами, часто используется для первоначального разведения и дальнейшей изоляции культур. Микробиологи приспосабливают агаровую среду для селекционного выращивания грибов путем добавления различных питательных веществ, таких как минералы, антибиотиков и т.д. Агаровая среда обладает и тем ценным качеством, что микроорганизмы, вызывающие заражение, без труда обнаруживаются на поверхности среды и таким образом, они могут быть уничтожены на самых ранних стадиях процесса роста.
Для разведения грибного мицелия могут быть использованы несколько типов агаровых сред. Наиболее часто используют картофельный агар (Potato Dextrose Agar, PDA) и мальтодекстриновый агар (Malt Dextrose Agar, MDA). Готовые смеси промышленного изготовления доступны в самых различных магазинах. Правда, они могут оказаться несколько дороже, чем при самостоятельном приготовлении агара, но если позволяют средства и не хочется тратить драгоценное время, то готовые смеси - это хороший выбор. Для тех, кто привык все делать своими руками, ниже приводятся два способа приготовления картофельного агара (PDA). Первый способ, уже не раз мною опробованный, основан на методике, описанной в издании The Mushroom Cultivator (“Грибовод”), авторы Paul Stamets и J.S. Chilton. Второй способ с успехом используется и пропагандируется грибоводнической группой MSSF. Попробуйте первый или второй способ, или же оцените оба. Вскоре вы сможете определиться, какой из способов лучше подходит для вас, а может быть, на основе полученного опыта вы придумаете свой способ, который со временем несомненно преобразуется во что-то еще. Процедура приготовления выглядит так же, как описание рецепта из поваренной книги.
Материалы, необходимые для обоих методов
Хлопчатобумажный бинт (продается в аптеках)
Алюминиевая фольга
Пробирки с накручиваемыми колпачками для автоклавной обработки - можно найти у снабженцев по медицинскому оборудованию или попросить в лаборатории. Лаборатории иногда избавляются от больших количеств таких пробирок. Поищите, поспрашивайте.
Небольшая воронка для заполнения пробирок
Мерные чашки
Скороварка
Две литровые бутылки или колбы с узким горлышком. Первым делом, несколько слов о скороварке. Скороварка - это, возможно, наиболее дорогостоящая вещь из всего инвентаря грибовода. Если она у вас уже имеется и ее размеры позволяют разместить внутри бутылки или банки, то можно считать, что вы полностью укомплектованы. Если нет, то новая скороварка обойдется вам приблизительно в $75 - $250, в зависимости от размера и места покупки. Скороварки продаются во многих хозяйственных магазинах, торгующих кухонной утварью.
Если у вас сложности с бюджетом, можно пойти по экономному пути и поискать скороварку на распродажах или на барахолке. Можно найти практически новую скороварку за $15 - 35. Постарайтесь найти скороварку с манометром, а не просто с клапаном-колпачком и без указателя давления. В любом случае, какую бы скороварку вы ни выбрали, очень важно соблюдать все правила безопасной эксплуатации, определенные производителем.
Картофельный агар. Метод №1
(Для приготовления приблизительно 1 литра среды)
Необходимые материалы:
300 грамм картофеля
20 грамм агара (поищите в организациях по снабжению медицинских лабораторий, магазинах здорового питания или на азиатских продовольственных рынках)
10 грамм декстрозы или другого сахара 2 грамма пивных дрожжей (необязательно)
Сварите картофель в 1 литре воды в течение 1 часа. Откиньте картофель, сохранив отвар. Разомните картофель, добавьте масла, соли и перца и съешьте. Сметана, лучок и другие приправы - по вкусу :). После того, как мы заморили червячка картофельным пюре, возьмем картофельный отвар, агар, сахар, дрожжи (необязательно) и хорошенько все смешаем в кастрюле. Для этой цели хорошо подходит веничек для взбивания, но взбивать не следует, нужно просто перемешивать. Наполните полученной смесью бутылки или колбы. Заполняйте емкости только на половину или три четверти объема. Закройте горлышки бутылок или колб хлопчатобумажными тампонами и оберните алюминиевой фольгой. Залейте в скороварку воду, чтобы она закрывала дно слоем в 1.5 см., поместите внутрь скороварки сетку, на которую поставьте бутылки или колбы. Поставьте на скороварку крышку и защелкните ее должным образом. Включите плиту и подождите, пока из скороварки не пойдет пар. После вентиляции в течение нескольких минут, закройте клапан (в соответствии с инструкцией к конкретной скороварке).
Кипятите бутылки под давлением 1 атм. (121 градус по Цельсию) в течение 15 минут. Не позволяйте температуре подниматься выше 121 градуса даже на самое короткое время, иначе произойдет карамелизация среды и она придет в негодность.
Через 15 минут выключите газ и дайте скороварке медленно остыть (в течение примерно 45 минут). Тем временем, снимите с пробирок колпачки, установите пробирки на штативе или в чистых консервных банках и поставьте штатив или консервные банки на чистую рабочую поверхность в месте, свободном от пыли. Когда бутылки с питательной средой остынут и их можно будет брать с помощью чистого полотенца или варежек для микроволновой печи, извлеките их из скороварки и перенесите к пробиркам. Круговыми движениями слегка перемешайте питательную среду, а затем удалите фольгу и хлопчатобумажные тампоны. Используя воронку, заполните пробирки примерно на одну треть. Наверните свободно колпачки на пробирки, поместите банки с пробирками в скороварку (убрав из скороварки лишнюю воду, если нужно), дождитесь увеличения давления до 1 атм. (121 градус по Цельсию) и оставьте вариться на 30 минут. После этого снова дайте скороварке постепенно остыть, чтобы давление снизилось до нормального.
Извлеките пробирки и закрутите колпачки плотнее. Закрепите пробирки каким-нибудь способом в наклоненном положении, чтобы поверхность агаровой среды приобрела «скошенный» вид, предоставляя максимальную поверхность для дальнейшего роста мицелия. (Пробирки, приготовленные таким образом, часто называют «косым агаром»).
По мере того, как среда охлаждается, она будет застывать в виде желе и, в конечном счете, пробирки можно будет вернуть в вертикальное положение; агаровая среда при этом останется на месте. Если пробирки не предполагается использовать сразу, их можно поместить в зип-локи и хранить в холодильнике в течение недель или месяцев. В дальнейшем, перед использованием пробирок из холодильника, необходимо убедиться в отсутствии заражения среды плесенью или бактериями.
Картофельный агар. Метод №2
(получается около литра питательной среды)
Необходимые материалы:
10 унций или 284 грамм картофеля
¾ унции или 21.3 грамм агара
¼ унции или 8 грамм декстрозы - можно заменить столовым сахаром
Шаг 1: Смешивание ингредиентов
Вымойте картофель, но не срезайте кожуру. Порежьте на небольшие кусочки.
Сварите картофель до хорошей готовности в полулитре воды. Процедите и сохраните отвар. Картофель можно выбросить или использовать в пищу.
Смешайте декстрозу/сахар, картофельный отвар и агар в металлической или термостойкой стеклянной чашке. Добавьте воды до литра.
Шаг 2: Растворение агара
Поместите агаровую смесь в скороварку. Накройте чашку алюминиевой фольгой.
Дождитесь, пока давление в скороварке поднимется до 1 атм. Варка в течение 20 минут приведет к полному растворению агара. Оставьте скороварку для медленного остывания.
Шаг 3: Заливка агара в пробирки
С помощью варежек для микроволновки и мерного стакана заполните каждую пробирку примерно на треть объема. Вместо штатива для пробирок могут быть использованы консервные банке. Оставшийся агар можно сохранить в бутылке, закрытой хлопчатобумажным или синтепоновым тампоном, а стерилизовать позже, вместе с пробирками. Если пробирки достать не удалось, вместо них можно использовать небольшие бутылочки. Если пробирки закрываются пластиковыми колпачками, то они должны закрываться неплотно, чтобы давление в процессе стерилизации выравнивалось. Хлопчатобумажные или синтепоновые тампоны помогают избежать этой проблемы, но при этом потребуется накрыть пробирки алюминиевой фольгой, чтобы капли конденсата с крышки остывающей скороварки не попадали на пробки.
Шаг 4: Стерилизация агара
Поместите пробирки/бутылки, содержащие агар, в скороварку и стерилизуйте под давлением 1 атм. в течение 25 минут. В эти 25 минут не входит время, необходимое для достижения нужного давления в скороварке. Дайте скороварке медленно остыть. Быстрый сброс давления может привести к интенсивному вскипанию агара в пробирках, выплёскиванию его через тампоны и колпачки пробки и к возможному заражению.
Шаг 5: Наклонное расположение пробирок
Протрите 10% раствором хлорсодержащего отбеливателя стол, на котором будут расположены в наклоненном положении пробирки. Работу следует производить в помещении без сквозняков. Надев кухонные варежки, расположите горячие пробирки на столе в наклоненном положении, положив пробирки одним краем на подходящий предмет. Предварительно стоит поэкспериментировать с деревянными брусочками или стопкой журналов для того, чтобы подобрать нужный угол наклона.
После желатинизации агара закройте плотнее колпачки. Готовые пробирки или бутылки следует хранить в прохладном, свободном от пыли месте. Покрытие из алюминиевой фольги предотвратит возможность заражения пробирок до их использования.
Методики стерильной работы с грибной культурой
После того, как агаровые пробирки остыли, самое время заняться разведением грибной культуры.
Необходимые материалы:
Скальпель или очень острый нож с тонким лезвием
Спиртовка или пропановая горелка с баллончиком, зажигалка или спички Металлические консервные банки или штативы для пробирок с косым агаром и одна банка и штатив для хранения готовых пробирок Держатель для скальпеля или ножа (см. ниже примеры для самостоятельного изготовления)
Микропористый бинт (такой, как в аптечках первой помощи, продается в аптеках) или обычный бинт (более дешевый вариант) Распылитель с раствором из 10% хлорсодержащего отбеливателя и 90% воды (необязательно)
Свежее, чистое плодовое тело гриба или грибов (для начинающих микологов очень рекомендуется использовать вешенку)
Выберите место в доме, офисе или лаборатории, свободное от пыли и возможных источников плесени или грибков. Работы производите на устойчивом столе или стойке, предварительно вымыв поверхность теплой мыльной водой и вытерев насухо (для дополнительной защиты можно также обработать поверхность аэрозолем из 10% раствора отбеливателя и вытереть затем насухо чистой тряпкой или бумажной салфеткой.) Закройте все окна, чтобы свести к минимуму циркуляцию воздуха (в идеале, постарайтесь перенести работы по культивированию на утренние часы, пока воздух чист от пыли, поднимаемой в воздух активными домочадцами). Разложите все материалы в готовом для работы виде и в пределах удобной досягаемости. Поместите агаровые пробирки в металлическую консервную банку (банки) или штативы. Зажгите свет или включите светильник. Тщательно простерилизуйте лезвие скальпеля в пламени и положите скальпель на подставку. Подставку можно выгнуть из проволоки (например из старой вешалки), жестяной банки или другого подручного материала. Целью изготовления такой подставки является обеспечение устойчивого положения инструмента, чтобы его лезвие, пока оно не используется, находилось возле пламени во избежание заражения.
Для начала возьмите свежий, чистый гриб. Несмотря на то, что внешняя поверхность грибного тела может содержать бактерии и споры плесени, внутренняя ткань обычно свободна от организмов, вызывающих заражение, если только гриб не перенасыщен водой.
Оторвите или отломите часть гриба (не отрезайте с помощью ножа, потому что лезвие занесет инфекцию с внешних поверхностей). Положите гриб на стол чистой поверхностью вверх (эта поверхность не должна касаться стола). Цель тут состоит в том, чтобы получить чистую, открытую поверхность, от которой может быть отделен очень небольшой кусочек грибной ткани, а сам кусочек оставался бы, насколько это возможно, нетронутым, пока не будет помещен в пробирку.
Сейчас вам нужно расположить рабочие материалы так, чтобы пробирка, пока вы помещаете в нее кусочек грибной ткани, как можно меньшее время оставалась открытой. Для того, чтобы вероятность заражения была минимальна, недопустимо класть пробирку или пробку на стол. Этот момент представляет некоторую сложность. Будет полезно сперва попрактиковаться с пустой пробиркой перед тем, как использовать «боевую» пробирку с агаром и грибную ткань. Дальнейшие указания подразумевают, что вы - правша. Если нет, то все придется делать в зеркальном порядке. Держите левую руку так, чтобы большой палец смотрел вниз, а остальные пальцы были расположены горизонтально. Поместите пробирку между средним и безымянным пальцами левой руки так, чтобы безымянный палец был сверху, средний - снизу пробирки, а пробка смотрела в направлении от руки. Пробирку следует держать только в горизонтальном положении, чтобы частицы из воздуха не попадали в горлышко пробирки. Скошенная поверхность агара, на которую вы будете помещать грибную ткань, должна смотреть вверх. Осторожно снимите пробку с пробирки и поместите ее между безымянным пальцем и мизинцем так, чтобы мизинец был сверху, а безымянный палец - снизу. (См. Рис. 2).
Рис.. 2 -- Немного мудрёно, но практика помогает
Используя свободные указательный и большой палец левой руки, крепко возьмите кусочек гриба с чистой поверхностью, смотрящей вверх или вбок. Правой рукой уверенно возьмите скальпель, держа его за ручку наподобие карандаша. Кончиком лезвия отрежьте от чистой грибной ткани очень маленький кусочек треугольной формы. Осторожно отделите грибную ткань и быстро поместите внутрь пробирки на край горлышка. Если нужно, стряхните кусочек гриба со скальпеля постукивающими движениями. Положите скальпель на место и быстро закройте пробирку пробкой. Теперь несколько раз постукайте нижней частью пробирки о тыльную сторону ладони для того, чтобы переместить грибную ткань на агаровую поверхность (См. Рис. 3). Поставьте пробирку в другую консервную банку, предназначенную для хранения инокулированных пробирок.
Рис. 3 -- Перемещаем с помощью постукивания
Комментарий к тексту на рисунке: Move to Here by Tapping the Tube
against the Heel of the Hand - переместите в это место путем
постукивания пробиркой по тыльной стороне ладони, Insert Here -
поместите сюда
Есть! Теперь у нас имеются очень хорошие шансы на то, что полученная культура гриба является чистой.
Проделайте то же самое с оставшимися пробирками и грибным материалом. Изготовление нескольких пробирок с каждого образца гриба важно по той причине, что даже при самой аккуратной работе иногда случаются заражения. После проведения инокуляции очередной пробирки простерилизуйте заново скальпель или лезвие ножа на пламени и оторвите свежий кусочек гриба, чтобы открыть другой участок чистой ткани грибного тела. После того, как работа с пробирками завершена, закрутите плотнее колпачки и обверните на каждой пробирке место, на котором колпачок граничит со стеклом, при помощи микропористой ленты. Микропористая лента позволит культуре «дышать», но предотвратит попадание инородных организмов через горлышко пробирки. Пометьте пробирки перманентным маркером или небольшими наклейками , указав дату и информацию о содержимом. Наконец, поместите инокулированные пробирки в темное и прохладное место (наилучшая температура 13 - 21 градусов по Цельсию). Через некоторое время (от нескольких дней до недели) грибная ткань станет пушистой, что связано с началом роста мицелия. Через несколько недель мицелий полностью покроет поверхность агара.
Если показалась плесень (ее легко распознать по спорам зеленого, черного или другого цвета) или бактериальное заражение (обычно окрашенная лоснящаяся субстанция ), то эта культура подлежит немедленному уничтожению, а пробирки и пробки следует вымыть в горячей мыльной воде. По возможности, пробирки с зараженной культурой нужно освобождать в отдельном месте, подальше от здоровых культур. Например, выйдите на улицу и выбросите содержимое прямо в мусорный бак. Для освобождения пробирки от питательной среды можно использовать китайскую палочку для еды; среду можно извлечь сразу целым кусочком или по частям. Шаг II: Методики стерильного переноса и зерновой мицелий Стерильный перенос на ряд агаровых пробирок Полученная агаровая пробирка, содержащая грибной мицелий, является «мастер-культурой» (маточной культурой). Если есть желание размножить культуру для того, чтобы иметь ее запас или чтобы поделиться с другими грибоводами, следует перенести грибной материал из одной пробирки в несколько других пробирок. Эту работу можно выполнить, используя точно такую же методику первоначального стерильного переноса, как это было описано выше.
Тем не менее, вместо использования фрагмента грибной ткани, взятого из плодового тела гриба, можно взять небольшой кусочек агара, содержащего мицелий из пробирки с маточной культурой. Перенос производится с помощью скальпеля или другого подходящего приспособления, например, инокуляционной петли, которую можно купить или изготовить самостоятельно из отрезка проволоки, прикрепленного к какой-нибудь ручке. (См. Рис. 4)
Рис. 4 -- Простое приспособление
Комментарий к тексту на рисунке: Inoculation Loop - инокуляционная
петля
Еще раз повторюсь, обязательно стерилизуйте инокуляционную петлю после каждой произведенной инокуляцией и сократите до минимума время, в течение которого пробирка остается открытой. После небольшой тренировки такие переносы будут получаться быстро и с превосходными результатами. Стерильный перенос на зерно для создания посадочного мицелия Следующим шагом в процессе культивирования будет увеличение количества мицелия путем выращивания его на зерне, получение так называемого «зернового мицелия». Грибные культуры, выращенные на зерне, легко размножаются при перетряхивании зерна и, как будет видно дальше, путем переноса из одной емкости в другую. Например, одна бутылка зернового мицелия может быть использована для инокуляции многих десятков литров плодоносящего субстрата. Зерно достаточно дешево и всегда имеется в магазинах здорового питания или в магазинах для животных.
Зерно легко колонизируется многими сапрофитами, с число которых входят
такие виды, как Pleurotus (Вешенка, устричный гриб) и Agaricus (шампиньон и его сородичи).
Вот две одинаково хорошо зарекомендовавшие себя методики. В первой используются бутылки объемом 0.33 или литровые из-под пива, воды или напитка и зерно пшеницы, которое можно заменить ржаным. Во второй методике используются стеклянные банки для консервирования и зерновой корм для птиц. Несмотря на то, что в обоих случаях возможны вариации с видами используемого зерна, изначально эти методики дают немного разные результаты. Попробуйте несколько вариантов и выберите для себя наилучший.
Основное преимущество бутылок состоит в том, что их горлышки имеют меньший размер и, соответственно, шансы на заражение также меньше. Это преимущество в дальнейшем может обернуться недостатком: через узкое горлышко гораздо труднее извлечь содержимое бутылки. Если у вас есть (или вы приобретете позже) бокс, снабженный антибактериальным HEPA-фильтром для работы в чистом ламинарном потоке воздуха ( это сведет проблему заражения к минимуму), то я рекомендую использовать банки, потому что с ними проще работать. Тем не менее, если вы умеете работать аккуратно, то можно достичь успеха при использовании любой технологии, даже без использования стерильного бокса. (См. Рис. 5)
Рис. 5 -- Два способа разведения мицелия
Комментарий к тексту на рисунке:
Слева: Spawn Method #1 - Метод размножения #1, Aluminium Cover - алюминиевый колпачок, Cotton Plug - хлопчатобумажный тампон, Mycelial Tissue - мицелий.
Справа: Spawn Method #2 - Метод размножения #2, Microporous Filter - бактериальный фильтр, Aluminium Cover - алюминиевая крышка, Mycelial Tissue - мицелий.
Материалы, необходимые для обеих методик:
Скороварка достаточного размера, чтобы вместить бутылки или банки Алюминиевая фольга Зерно (пшеница, рожь, просо или сорго)
Приготовление зерна, метод №1
Необходимые материалы
Чистая 0.33 или литровая бутылка из-под пива, воды или напитка.
Хлопчатобумажный бинт или синтепон (аналогичный набивке в подушках)
Зерно (пшеница, рожь, просо или сорго)
Рецепт для бутылки 0.33:
1/3 чашки пшеницы или другого зерна
¼ чашки воды
Рецепт для литровой бутылки:
1 чашка пшеницы
2/3 чашки воды
Руководство по работе с зерном и бутылками
Есть одно важное замечание, касающееся приготовления зерна: объем зерна увеличивается примерно вдвое после его варки или стерилизации. Правило большого пальца звучит так: заполняйте контейнер сухим зерном только на одну треть. При использовании бутылок, воздухопроницаемая пробка может быть изготовлена из хлопчатобумажного бинта (продается в аптеках) или из синтепона (продается в магазинах тканей).
Приготовление/Стерилизация
Зерно может быть приготовлено/стерилизовано в один или два этапа. Процесс в два этапа дает очень однородный продукт, но если имеющееся время ограничено, то варка и стерилизация могут быть произведены одновременно.
Процесс в два этапа
После того, как бутылки заполнены зерном и водой, поместите их в скороварку и накройте листом алюминиевой фольги. Фольга предохраняет воздухопроницаемые пробки от увлажнения конденсатом. Сварите зерно в скороварке под давлением 1 атм. в течение семи минут. Дайте скороварке остыть а потом, надев кухонные варежки, перетрясите горячие бутылки, чтобы влажные и сухие зерна перемешались. Поместите контейнеры обратно в скороварку и стерилизуйте при давлении 1 атм. в течение 45 минут. Время разогрева скороварки в эти 45 минут не входит. Затем дайте скороварке медленно остыть.
Извлеките бутылки и перетрясите еще раз, чтобы перемешать зерно. Накройте фильтрующие пробки бумагой, чтобы на них не попадала пыль. Это поможет избежать заражения. Хранить бутылки нужно в шкафу или коробке, в свободном от пыли месте. В связи с тем, что зерно с течением времени постепенно высыхает, не следует заготавливать бутылки слишком заранее.
Процесс в один этап
Порядок действий такой же как выше, но варка производится просто в течение 45 минут при давлении 1 атм. После того, как скороварка уже остыла, но бутылки все еще горячие, извлеките бутылки с помощью кухонных варежек и перетрясите их, чтобы влажные зерна перемешались с относительно сухими. Правильно приготовленное зерно выглядит разбухшим и легко перетряхивается с характерным «звонким», но мягким звуком. Переваренные зерна, приготовленные с избытком воды, зачастую лопаются. В результате, крахмалистое содержимое способствует слипанию зерен, делая перетряхивание затруднительным. Зерно, приготовленное с недостаточным количеством воды, будет твердым, сморщенным и непригодным для роста мицелия. Приготовление зерна, метод №2 Необходимые материалы:
Полулитровые или литровые банки для консервирования Микропористые фильтры, подходящие по размеру к горлышкам банок (из микологических комплектов или изготовленные самостоятельно)
Алюминиевая фольга
Сетчатые мешочки для процеживания краски (есть в хозяйственном или строительном магазине)
Приготовление зерна
Отмерьте одну банку зерна на каждые три банки будущего субстрата и засыпьте зерно в малярный мешочек, но не больше половины его объема. Если нужно, заполните больше мешочков, только не забывайте, что за один раз можно сварить только то количество мешочков, которое поместится в скороварке. Завяжите мешочек шнурком, поместите его в кастрюлю или на дно скороварки (крышку пока не закрывайте), добавьте воды, чтобы только-только покрыть зерно и варите в течение 30 минут. Затем перенесите мешочек в раковину и промойте холодной водой в течение нескольких минут. Промывка способствует удалению вываренного крахмала, так что зерно не будет слипаться.
Дайте воде стечь в течение нескольких минут. Пока вода стекает, вставьте фильтры в кольца, которые будут их фиксировать на горлышках банок . Фильтры можно приобрести у поставщиков (см. ссылки в конце статьи) или вырезать по размеру горлышка из подходящей материи, например из плотного и жесткого полиэстера (курточная ткань). Вместо фильтра можно попробовать использовать диск, который идет с фиксирующим кольцом, перевернув его для обеспечения некоторой циркуляции воздуха. Однако, фильтрующие качества такого метода остаются под вопросом, а риск заражения заметно возрастает. Если вы собираетесь заниматься грибоводством в течение длительного времени, стоит потратить определенную сумму на приобретение многоразовых фильтров.
Приготовление/стерилизация
Развяжите мешочек и заполните зерном банки. Банки должны быть заполнены наполовину или на две трети. Установите на горлышки банок крышки с фильтрами, но не очень плотно. Скороварки обычно идут с сетками, которые не дают банкам касаться дна. Добавьте в скороварку воды, чтобы она почти доходила до банок, когда они стоят на сетке. (воды должно быть по крайней мере сантиметров пять).
Поставьте банки в скороварку. Внимательно изучите инструкции производителя скороварки, а особенно информацию, относящуюся к ее безопасной эксплуатации. Дождитесь, пока давление в скороварке поднимется до 1 атм. (121 град. Цельсия) и поддерживайте это давление в течение двух с половиной часов. Выключите газ и дайте скороварке остыть в течение 30 минут. Осторожно извлеките банки из скороварки, используя чистые кухонные варежки, если банки еще слишком горячие. Закройте крышки на банках плотнее и оберните их алюминиевой фольгой. Сильно встряхните банки, чтобы удостовериться, что зерно не слиплось и не сделалось комом. Хранить банки до использования нужно в чистом, свободном от пыли месте.
Добавки к зерну
Для некоторые сортов грибов кислотность субстрата, которая выражается в pH, может влиять на показатели роста. Кислотность может быть оптимизирована путем добавления 1 столовой ложки молотого известняка (CaCO3) к 4.5 литрам воды и использования в дальнейшем этой смеси в качестве добавки к зерну. Известняк можно купить в садово-огородном отделе (он иногда называется «сельскохозяйственный известняк»). Вид Agaricus bisporous (шампиньон, или Портобелло) является хорошим примером того, когда рост мицелия улучшается после добавления к зерну известняка. Более полная информация по требованиям к субстрату для различных видов грибов имеется в специальных изданиях, например в книге «Грибовод» Пола Стэймета (Paul Stamet, “The Mushroom Cultivator”, см. «Источники» в конце статьи).
Перенос агаровой культуры на зерно в бутылках или банках Одной пробирки хватит для инокуляции нескольких банок или бутылок с зерном, потому что на каждую банку уходит только крошечный кусочек мицелия. Техника инокуляции, вообще говоря, должна быть стерильной, как в описано в предыдущем разделе. Еще раз повторюсь, все материалы и принадлежности должны быть расположены на рабочем месте до начала работы. Сперва потренируйтесь на пустых банках и пробирках, пока не почувствуете, что можете делать все быстро и удобно.
Для работы с бутылками или банками хорошо использовать специальную подставку, на которой бутылки или банки располагаются в горизонтальном положении, пока производятся переносы. Это освобождает руки для открывания и снятия крышек. Подставку можно без труда сделать из молочного тетрапака, вырезав в нем выемки подходящего размера. После того, как вы сняли колпачок с пробирки или крышку с бутылки или банки, используйте инокуляционную петлю (Рис. 4) для того, чтобы вырезать небольшой кусочек мицелия из агара. Поместите мицелий внутрь банки и закройте крышку на банке и колпачок на пробирке. Если нужно, постучите по банке, чтобы мицелий оказался на зерне. Обязательно стерилизуйте инокуляционную петлю в пламени после каждой инокуляции и не забывайте держать пробирку и банку в горизонтальном положении в течение всего процесса, чтобы исключить попадание на субстрат частиц из воздуха.
После того, как банки инокулированы, поставьте на них перманентным маркером дату или наклейте ярлычки из липкой бумаги. Можно также поставить на контейнере стрелочку, указывающую на место, куда был помещен мицелий, потому что при дальнейшем наблюдении порою трудно найти это место, пока мицелий не начал расти. После того, как начался рост мицелия на зерне, периодически встряхивайте контейнер, чтобы ускорить колонизацию и предотвратить слипание зерна в плотную массу. Мицелий вешенки или шампиньона хорошо растет при комнатной температуре. После окончательной колонизации культуры мицелий можно хранить в холодильнике, чтобы сохранить его жизнеспособность.
Шаг III: Основной субстрат и стимуляция плодоношения
Третья и заключительная фаза культивирования грибов заключается в том, чтобы еще больше размножить мицелий (но обычно не на зерне, а на другой среде) и обеспечить такие условия окружающей среды, при которых произойдет стимуляция плодоношения. Субстраты для плодоношения могут отличаться по составу в зависимости от вида выращиваемого гриба. В этой статье мы рассмотрим требования к субстрату и условиям, необходимым для плодоношения вида Pleurotus (устричные грибы, вешенка). Вешенки являются превосходным выбором для начинающего грибовода, потому что мицелий вешенки растет быстро, ведет себя агрессивно по отношению к нежелательным организмам и не требует создания каких-то особых условий для успешного плодоношения. Нужно отметить, что сорта вешенки отличаются по цвету. Среди имеющихся в продаже сортов имеются вешенки белого, коричневого, розового и желтого цветов.
Субстраты для плодоношения
Вешенка может плодоносить на различных материалах, таких как древесина твердых пород (чурки), солома, опилки, кукурузные кочерыжки, измельченные газеты и т.д. Избегайте использования опилок или стружек от древесины хвойных пород, таких как сосна, потому что они подавляют рост мицелия вешенки. Субстрат для выращивания вешенки можно купить в сельскохозяйственных и животноводческих магазинах. В продаже могут быть тюки соломы или древесные стружки для подстилки. Пилорамы, на которых пилят древесину твердых пород и деревообрабатывающие компании тоже являются хорошим источником сырья для приготовления субстрата. Проявите наблюдательность и смекалку.
Приготовление субстрата
Вешенка может быть выращена на пастеризованном субстрате, который проще в приготовлении и дешевле, чем стерильная среда. Целью пастеризации является выщелачивание растворимых компонентов, которые могут способствовать развитию конкурирующих грибков, а также уничтожение насекомых-паразитов. Простой способ приготовления пастеризованной рубленой соломы или аналогичного материала - это насыщение кипящей водой в течение 30 минут а затем отцеживание и охлаждение. Влажность субстрата считается подходящей, если при сжатии субстрата в руке вода только-только проступает в виде капелек между пальцами.
Для использовании бОльших количеств субстрата или деревянных чурок , на улице можно использовать 200-литровую бочку, разогревая ее подходящей газовой горелкой. Наполненную субстратом и водой бочку можно довести до кипения за 30-45 минут. Затем субстрат нужно отцедить (можно сделать сито из проволоки и поместить на дно бочки перед загрузкой субстрата). Альтернативный способ - наполнить наполовину субстратом малярные сеточки, завязать их и заполнить ими бочку на ½ или ¾ объема, добавить води и вскипятить, как указано выше.
Количество плодоносящего субстрата и контейнеры
Плодоношение может происходить при любом количестве субстрата, но для начинающих грибоводов было бы правильным начать с небольших количеств, для того, чтобы отточить свою технику. Двухлитровый тетрапак из-под молока с помещенным внутрь полиэтиленовым пакетом - вот подходящий размер для первых экспериментов. Другой вариант - купить в хозяйственном магазине пластиковые рукава или пищевые контейнеры с крышками. Они недорогие, прочные, транспортабельные и через них хорошо видно процесс разрастания культуры.
Обогащение субстрата
Урожайность может быть повышена за счет добавок, богатых питательными веществами, таких как зерна кофе, целлюлозная мука, рисовые отруби и т.д. Тем не менее, добавки следует использовать с известной осторожностью, поскольку их применение увеличивает риск заражения. В большинстве случаев подобные материалы добавляют после первоначального зарастания культуры мицелием, т.е. после того, как субстрат полностью колонизирован и опасность заражения меньше. Попробуйте с помощью палочек для еды сделать в колонизированном мицелии небольшие туннели (сверху вниз) а затем засыпьте в них пастеризованную добавку (например с помощью воронки). Такой способ поможет мицелию быстро освоить добавку, не позволяя другим организмам сделать это быстрее.
Размножение посадочного мицелия
Чем больше зернового мицелия использовано для инокуляции субстрата, тем скорее он будет колонизирован, следовательно, вероятность заражения при этом меньше, а плодоношение начнется быстрее. В связи с тем, что пастеризованные культуры могут подвергнуться заражению плесенью и бактериями, для первого раза лучше явно перебрать с количеством мицелия для инокуляции. Неплохо будет, если на трехлитровый объем субстрата вы добавите чашку зернового мицелия.
Перед тем, как открыть бутылку или банку, хорошенько перетрясите зерно. Рассыпьте зерновой мицелий по поверхности субстрата или перемешайте чистыми руками субстрат и зерно на противне, а затем наполните полученной смесью пластиковый пакет или контейнер. Завяжите пакет свободным узлом или просто подверните открытую часть. Если на контейнере есть крышка, то через несколько дней надо будет проколоть в ней небольшие отверстия для притока свежего воздуха. Положите пакет или контейнер в место, свободное от пыли и может быть даже накройте сверху бумагой или пленкой, чтобы вместе с пылью не занести на субстрат заражение.
Большинство штаммов вешенки, особенно те, которые используются на промышленном уровне, растут быстро при температуре от 18 до 24 град. Цельсия и не требуют понижения температуры для инициации плодоношения. В течение разрастания мицелия культура должна содержаться в среде с повышенной влажностью и минимальной циркуляцией воздуха. Мицелий вешенки может выжить при довольно высоком уровне содержания углекислого газа (CO2). Субстрат в двухлитровом тетрапаке из-под молока при температуре 21-24 град. Цельсия должен полностью зарасти мицелием примерно за три недели.
Плодоношение
В обычных условиях культура не будет плодоносить до тех пор, пока субстрат не колонизирован полностью. Небольшие образования или коралловидные выросты на поверхности говорят о том, что культура начала плодоносить. Несмотря на то, что понижение температуры субстрата для плодоношения обычно не требуется, небольшое количество рассеянного света считается важным фактором.
Для образования плодовых тел нормальной формы требуется больше свежего воздуха, чем при росте мицелия, но обеспечение высокой влажности также является необходимым. Чтобы выполнить это условие, культуру обычно помещают в пластиковый пакет с отверстиями для аэрации или в коробку (террариум), в которой имеется лоток с увлажненным гравием. В случае использования контейнера с крышкой, после появления грибных зародышей, т.е. когда начинают формироваться крошечные скопления, напоминающие миниатюрные грибы, крышка может быть снята, а для поддержания влажности потребуются упомянутые выше пакеты с отверстиями или террариум. Для того, чтобы из грибного зародыша вырос полноценный гриб вешенки, может потребоваться неделя, в зависимости от температуры и влажности. Если края шляпки гриба начали заворачиваться кверху, это означает, что гриб достиг наибольшей зрелости. К этому времени нужно решить, что делать с грибом дальше - использовать его для дальнейшего разведения или съесть за ужином.(См. Рис. 6)
Рис. 6 -- Успешное плодоношение
Что делать дальше
После того, как вы освоите рассмотренные методики и достигните успехов в выращивании легко культивируемых сортов, таких как вешенка, вам, возможно, захочется попробовать свои силы на других видах. Может быть, ваши домочадцы даже попросят сделать дома уголок, где были бы собраны различные плодоносящие сорта, разрастающиеся культуры и прочие атрибуты грибоводства. Может быть, вы продолжите наступление на контаминацию и приобретете ламинарный бокс или даже оборудуете лабораторию в неиспользуемой комнате или ванной. А может быть, вы захотите исследовать возможность натурализации некоторых видов в саду или где-нибудь еще на улице.
Первым делом, если в вашем районе проводятся обучение и практические занятия по культивированию, я очень рекомендую записаться на них. Чем больше вы будете открыты к изучению новых техник и чем больше будете общаться с грибоводами на различных уровнях, тем больше у вас будет успехов и достижений. Ваше местное микологическое общество может предлагать курсы. Возможно, даже существует комитет по культивированию или по крайней мере список лиц, заинтересованных в культивировании, с которыми вы могли бы обмениваться идеями и помогать друг другу полезной информацией и советами.
Если в вашей местности не проводятся занятия, попробуйте связаться с опытными микологами, которые вероятно с радостью взялись бы за обучение, если бы аудитория проявляла соответствующий интерес. Или организуйте комитет по культивированию самостоятельно! Сейчас, если вы еще этого не сделали, я рекомендую вам приобрести какое-нибудь хорошее руководство по грибоводству, например «Грибовод» (The Mushroom Cultivator), авторы Paul Stamets and J.S. Chilton (см. «Источники»»). Вы можете также заказать некоторые грибные культуры по почте, например у таких поставщиков, как Fungi Perfecti или Western Biologicals (опять же, см. «Источники») и эти культуры будут отосланы к вам вместе с соответствующими инструкциями. Без сомнения, когда вы хорошо освоите рассмотренные техники культивирования, вы можете начать собственные эксперименты с видами, которые можно найти в своей местности или в магазине, размножая их вегетативным путем или даже освоив продвинутую методику работы со спорами. Познайте волнующее переживание того, как крошечные зародыши превращаются в восхитительные зрелые грибы, выращенные из культуры, созданной собственными руками, и тогда что-то решительно изменится в вас. Вот здесь-то и начинается настоящее путешествие в мир грибов!
Анатолий, последний ваш пост не отображается, может много текста?
Ну да , не влезло . Хотел уважаемому Котяро дать почитать про мицелий известный труд :
Выращивание грибов. Советы начинающим
Мудрость, рожденная в простом
Автор: Terri Marie Beauséjour
Copyright 1999, all rights reserved.
Он находится в моем блоге .
ну дак и добавьте прямой линк на блог? Я так понимаю на этом же сайте он?
Добавлено: и в блоге она не отображается :D
https://fermer.ru/node/76850
Анатолий, а ссылку вы проверяли сами? Посмотрите, я там не вижу статьи... Текст не отображается
На блоке текст не весь показывется .
Выращивание грибов. Советы начинающим
Мудрость, рожденная в простом
Автор: Terri Marie Beauséjour
Copyright 1999, all rights reserved.
Если перспектива выращивания собственных грибов окрылила вас, то первые же попытки, скорее всего, повергли в уныние в связи со сложностью и потенциальной дороговизной таких вещей, как «стерильные технологии,» «чистые помещения», «ламинарные боксы» и «агаровые питательные среды». А может быть вы, будучи склонны к исследованиям, проделали немалую работу, героически пытаясь отделить чистые культуры мицелия, и все лишь для того, чтобы увидеть, как нежный белый мицелий расцветает всеми цветами радуги, благодаря пушистым спорам плесени, или превращается в лоснящиеся лужицы жидкости в связи с бактериальным заражением. Мужайтесь, вы не одиноки!
Являясь председателем Комитета по культивированию Микологического общества Сан-Франциско (MSSF), я общаюсь с многими людьми, посвятившими себя культивированию грибов, и они подтверждают, что указанные выше сложности - это две основные преграды, тормозящие прогресс в грибоводстве. Признавая необходимость в оказании помощи по преодолению указанных проблем, Комитет по культивированию MSSF периодически организовывал лекции и семинары, посвященные вопросам выращивания грибов. Я весьма признательна преподавателям, принимавшим участие в тех семинарах за методики, которые я предлагаю в этой статье.
Цели и задачи
Наиболее разумная цель, конечно, начать с одного плодового тела гриба и вырастить из него целый букет грибов. Грибы могут быть размножены двумя способами—спорами (это аналог семян у растений) или путем воспроизведения ткани, извлеченной из плодового тела (аналогично вегетативному размножению растений через прививание). Для начала мы будем использовать второй способ, который проще и дает начинающему грибоводу лучшие шансы на успех.
Задачи у нас вот какие:
Начать со стерильного фрагмента грибной ткани и перенести его на питательную среду (на самом деле, этот процесс будет последовательно проводиться в три этапа на различных средах, как вы увидите дальше) Из основной культуры создать несколько ее образцов Избежать заражения культуры И, наконец, создать среду и условия, в которых грибной организм начнет плодоношение.
Ваша культура должна пройти через три отдельные фазы (См. Рис. 1):
Стерильная культура на агаровой среде
Стерильная культура на зерне, известная также как «зерновой мицелий»
Плодоношение на пастеризованном субстрате
Пусть слово «стерильность», наряду с новыми терминами, не смущает и не останавливает вас. Да, потенциальные источники заражения существуют повсеместно в окружающей среде: в наших домах, даже в чистых комнатах и лабораториях. Цель состоит в том, чтобы предотвратить их попадание в разводимую культуру и исключить «борьбу» за питательную среду, оставив исключительной право ее использования нашим грибным культурам. Обладая определенной аккуратностью и после небольшой тренировки с использованием простых методик, этот процесс может быть успешно освоен каждым. В общем, дышите глубже и читайте о деталях процесса дальше, шаг за шагом.
Рис. 1 -- Это действительно просто! (Рисунки выполнены T.
Beauséjour)
Комментарий к тексту на рисунке (по часовой стрелке): Sterile Tissue Culture - стерильная ткань гриба,Inоculation in Grain - инокуляция зерна, Incubation of Spawn - рост зернового мицелия,Transfer to Final Substrate - перенос на основной субстрат, Mushrooms Fruiting in Substrate - плодоношение грибов на субстрате.
Шаг I: Подготовка агара и стерильной культуры
Подготовка агара: Первым шагом является подготовка агаровой питательной среды. Произведенный из морских водорослей агар, в совокупности с добавочными ингредиентами, часто используется для первоначального разведения и дальнейшей изоляции культур. Микробиологи приспосабливают агаровую среду для селекционного выращивания грибов путем добавления различных питательных веществ, таких как минералы, антибиотиков и т.д. Агаровая среда обладает и тем ценным качеством, что микроорганизмы, вызывающие заражение, без труда обнаруживаются на поверхности среды и таким образом, они могут быть уничтожены на самых ранних стадиях процесса роста.
Для разведения грибного мицелия могут быть использованы несколько типов агаровых сред. Наиболее часто используют картофельный агар (Potato Dextrose Agar, PDA) и мальтодекстриновый агар (Malt Dextrose Agar, MDA). Готовые смеси промышленного изготовления доступны в самых различных магазинах. Правда, они могут оказаться несколько дороже, чем при самостоятельном приготовлении агара, но если позволяют средства и не хочется тратить драгоценное время, то готовые смеси - это хороший выбор. Для тех, кто привык все делать своими руками, ниже приводятся два способа приготовления картофельного агара (PDA). Первый способ, уже не раз мною опробованный, основан на методике, описанной в издании The Mushroom Cultivator (“Грибовод”), авторы Paul Stamets и J.S. Chilton. Второй способ с успехом используется и пропагандируется грибоводнической группой MSSF. Попробуйте первый или второй способ, или же оцените оба. Вскоре вы сможете определиться, какой из способов лучше подходит для вас, а может быть, на основе полученного опыта вы придумаете свой способ, который со временем несомненно преобразуется во что-то еще. Процедура приготовления выглядит так же, как описание рецепта из поваренной книги.
Материалы, необходимые для обоих методов
Хлопчатобумажный бинт (продается в аптеках)
Алюминиевая фольга
Пробирки с накручиваемыми колпачками для автоклавной обработки - можно найти у снабженцев по медицинскому оборудованию или попросить в лаборатории. Лаборатории иногда избавляются от больших количеств таких пробирок. Поищите, поспрашивайте.
Небольшая воронка для заполнения пробирок
Мерные чашки
Скороварка
Две литровые бутылки или колбы с узким горлышком. Первым делом, несколько слов о скороварке. Скороварка - это, возможно, наиболее дорогостоящая вещь из всего инвентаря грибовода. Если она у вас уже имеется и ее размеры позволяют разместить внутри бутылки или банки, то можно считать, что вы полностью укомплектованы. Если нет, то новая скороварка обойдется вам приблизительно в $75 - $250, в зависимости от размера и места покупки. Скороварки продаются во многих хозяйственных магазинах, торгующих кухонной утварью.
Если у вас сложности с бюджетом, можно пойти по экономному пути и поискать скороварку на распродажах или на барахолке. Можно найти практически новую скороварку за $15 - 35. Постарайтесь найти скороварку с манометром, а не просто с клапаном-колпачком и без указателя давления. В любом случае, какую бы скороварку вы ни выбрали, очень важно соблюдать все правила безопасной эксплуатации, определенные производителем.
Картофельный агар. Метод №1
(Для приготовления приблизительно 1 литра среды)
Необходимые материалы:
300 грамм картофеля
20 грамм агара (поищите в организациях по снабжению медицинских лабораторий, магазинах здорового питания или на азиатских продовольственных рынках)
10 грамм декстрозы или другого сахара 2 грамма пивных дрожжей (необязательно)
Сварите картофель в 1 литре воды в течение 1 часа. Откиньте картофель, сохранив отвар. Разомните картофель, добавьте масла, соли и перца и съешьте. Сметана, лучок и другие приправы - по вкусу :). После того, как мы заморили червячка картофельным пюре, возьмем картофельный отвар, агар, сахар, дрожжи (необязательно) и хорошенько все смешаем в кастрюле. Для этой цели хорошо подходит веничек для взбивания, но взбивать не следует, нужно просто перемешивать. Наполните полученной смесью бутылки или колбы. Заполняйте емкости только на половину или три четверти объема. Закройте горлышки бутылок или колб хлопчатобумажными тампонами и оберните алюминиевой фольгой. Залейте в скороварку воду, чтобы она закрывала дно слоем в 1.5 см., поместите внутрь скороварки сетку, на которую поставьте бутылки или колбы. Поставьте на скороварку крышку и защелкните ее должным образом. Включите плиту и подождите, пока из скороварки не пойдет пар. После вентиляции в течение нескольких минут, закройте клапан (в соответствии с инструкцией к конкретной скороварке).
Кипятите бутылки под давлением 1 атм. (121 градус по Цельсию) в течение 15 минут. Не позволяйте температуре подниматься выше 121 градуса даже на самое короткое время, иначе произойдет карамелизация среды и она придет в негодность.
Через 15 минут выключите газ и дайте скороварке медленно остыть (в течение примерно 45 минут). Тем временем, снимите с пробирок колпачки, установите пробирки на штативе или в чистых консервных банках и поставьте штатив или консервные банки на чистую рабочую поверхность в месте, свободном от пыли. Когда бутылки с питательной средой остынут и их можно будет брать с помощью чистого полотенца или варежек для микроволновой печи, извлеките их из скороварки и перенесите к пробиркам. Круговыми движениями слегка перемешайте питательную среду, а затем удалите фольгу и хлопчатобумажные тампоны. Используя воронку, заполните пробирки примерно на одну треть. Наверните свободно колпачки на пробирки, поместите банки с пробирками в скороварку (убрав из скороварки лишнюю воду, если нужно), дождитесь увеличения давления до 1 атм. (121 градус по Цельсию) и оставьте вариться на 30 минут. После этого снова дайте скороварке постепенно остыть, чтобы давление снизилось до нормального.
Извлеките пробирки и закрутите колпачки плотнее. Закрепите пробирки каким-нибудь способом в наклоненном положении, чтобы поверхность агаровой среды приобрела «скошенный» вид, предоставляя максимальную поверхность для дальнейшего роста мицелия. (Пробирки, приготовленные таким образом, часто называют «косым агаром»).
По мере того, как среда охлаждается, она будет застывать в виде желе и, в конечном счете, пробирки можно будет вернуть в вертикальное положение; агаровая среда при этом останется на месте. Если пробирки не предполагается использовать сразу, их можно поместить в зип-локи и хранить в холодильнике в течение недель или месяцев. В дальнейшем, перед использованием пробирок из холодильника, необходимо убедиться в отсутствии заражения среды плесенью или бактериями.
Картофельный агар. Метод №2
(получается около литра питательной среды)
Необходимые материалы:
10 унций или 284 грамм картофеля
¾ унции или 21.3 грамм агара
¼ унции или 8 грамм декстрозы - можно заменить столовым сахаром
Шаг 1: Смешивание ингредиентов
Вымойте картофель, но не срезайте кожуру. Порежьте на небольшие кусочки.
Сварите картофель до хорошей готовности в полулитре воды. Процедите и сохраните отвар. Картофель можно выбросить или использовать в пищу.
Смешайте декстрозу/сахар, картофельный отвар и агар в металлической или термостойкой стеклянной чашке. Добавьте воды до литра.
Шаг 2: Растворение агара
Поместите агаровую смесь в скороварку. Накройте чашку алюминиевой фольгой.
Дождитесь, пока давление в скороварке поднимется до 1 атм. Варка в течение 20 минут приведет к полному растворению агара. Оставьте скороварку для медленного остывания.
Шаг 3: Заливка агара в пробирки
С помощью варежек для микроволновки и мерного стакана заполните каждую пробирку примерно на треть объема. Вместо штатива для пробирок могут быть использованы консервные банке. Оставшийся агар можно сохранить в бутылке, закрытой хлопчатобумажным или синтепоновым тампоном, а стерилизовать позже, вместе с пробирками. Если пробирки достать не удалось, вместо них можно использовать небольшие бутылочки. Если пробирки закрываются пластиковыми колпачками, то они должны закрываться неплотно, чтобы давление в процессе стерилизации выравнивалось. Хлопчатобумажные или синтепоновые тампоны помогают избежать этой проблемы, но при этом потребуется накрыть пробирки алюминиевой фольгой, чтобы капли конденсата с крышки остывающей скороварки не попадали на пробки.
Шаг 4: Стерилизация агара
Поместите пробирки/бутылки, содержащие агар, в скороварку и стерилизуйте под давлением 1 атм. в течение 25 минут. В эти 25 минут не входит время, необходимое для достижения нужного давления в скороварке. Дайте скороварке медленно остыть. Быстрый сброс давления может привести к интенсивному вскипанию агара в пробирках, выплёскиванию его через тампоны и колпачки пробки и к возможному заражению.
Шаг 5: Наклонное расположение пробирок
Протрите 10% раствором хлорсодержащего отбеливателя стол, на котором будут расположены в наклоненном положении пробирки. Работу следует производить в помещении без сквозняков. Надев кухонные варежки, расположите горячие пробирки на столе в наклоненном положении, положив пробирки одним краем на подходящий предмет. Предварительно стоит поэкспериментировать с деревянными брусочками или стопкой журналов для того, чтобы подобрать нужный угол наклона.
После желатинизации агара закройте плотнее колпачки. Готовые пробирки или бутылки следует хранить в прохладном, свободном от пыли месте. Покрытие из алюминиевой фольги предотвратит возможность заражения пробирок до их использования.
Методики стерильной работы с грибной культурой
После того, как агаровые пробирки остыли, самое время заняться разведением грибной культуры.
Необходимые материалы:
Скальпель или очень острый нож с тонким лезвием
Спиртовка или пропановая горелка с баллончиком, зажигалка или спички Металлические консервные банки или штативы для пробирок с косым агаром и одна банка и штатив для хранения готовых пробирок Держатель для скальпеля или ножа (см. ниже примеры для самостоятельного изготовления)
Микропористый бинт (такой, как в аптечках первой помощи, продается в аптеках) или обычный бинт (более дешевый вариант) Распылитель с раствором из 10% хлорсодержащего отбеливателя и 90% воды (необязательно)
Свежее, чистое плодовое тело гриба или грибов (для начинающих микологов очень рекомендуется использовать вешенку)
Выберите место в доме, офисе или лаборатории, свободное от пыли и возможных источников плесени или грибков. Работы производите на устойчивом столе или стойке, предварительно вымыв поверхность теплой мыльной водой и вытерев насухо (для дополнительной защиты можно также обработать поверхность аэрозолем из 10% раствора отбеливателя и вытереть затем насухо чистой тряпкой или бумажной салфеткой.) Закройте все окна, чтобы свести к минимуму циркуляцию воздуха (в идеале, постарайтесь перенести работы по культивированию на утренние часы, пока воздух чист от пыли, поднимаемой в воздух активными домочадцами). Разложите все материалы в готовом для работы виде и в пределах удобной досягаемости. Поместите агаровые пробирки в металлическую консервную банку (банки) или штативы. Зажгите свет или включите светильник. Тщательно простерилизуйте лезвие скальпеля в пламени и положите скальпель на подставку. Подставку можно выгнуть из проволоки (например из старой вешалки), жестяной банки или другого подручного материала. Целью изготовления такой подставки является обеспечение устойчивого положения инструмента, чтобы его лезвие, пока оно не используется, находилось возле пламени во избежание заражения.
Для начала возьмите свежий, чистый гриб. Несмотря на то, что внешняя поверхность грибного тела может содержать бактерии и споры плесени, внутренняя ткань обычно свободна от организмов, вызывающих заражение, если только гриб не перенасыщен водой.
Оторвите или отломите часть гриба (не отрезайте с помощью ножа, потому что лезвие занесет инфекцию с внешних поверхностей). Положите гриб на стол чистой поверхностью вверх (эта поверхность не должна касаться стола). Цель тут состоит в том, чтобы получить чистую, открытую поверхность, от которой может быть отделен очень небольшой кусочек грибной ткани, а сам кусочек оставался бы, насколько это возможно, нетронутым, пока не будет помещен в пробирку.
Сейчас вам нужно расположить рабочие материалы так, чтобы пробирка, пока вы помещаете в нее кусочек грибной ткани, как можно меньшее время оставалась открытой. Для того, чтобы вероятность заражения была минимальна, недопустимо класть пробирку или пробку на стол. Этот момент представляет некоторую сложность. Будет полезно сперва попрактиковаться с пустой пробиркой перед тем, как использовать «боевую» пробирку с агаром и грибную ткань. Дальнейшие указания подразумевают, что вы - правша. Если нет, то все придется делать в зеркальном порядке. Держите левую руку так, чтобы большой палец смотрел вниз, а остальные пальцы были расположены горизонтально. Поместите пробирку между средним и безымянным пальцами левой руки так, чтобы безымянный палец был сверху, средний - снизу пробирки, а пробка смотрела в направлении от руки. Пробирку следует держать только в горизонтальном положении, чтобы частицы из воздуха не попадали в горлышко пробирки. Скошенная поверхность агара, на которую вы будете помещать грибную ткань, должна смотреть вверх. Осторожно снимите пробку с пробирки и поместите ее между безымянным пальцем и мизинцем так, чтобы мизинец был сверху, а безымянный палец - снизу. (См. Рис. 2).
Рис.. 2 -- Немного мудрёно, но практика помогает
Используя свободные указательный и большой палец левой руки, крепко возьмите кусочек гриба с чистой поверхностью, смотрящей вверх или вбок. Правой рукой уверенно возьмите скальпель, держа его за ручку наподобие карандаша. Кончиком лезвия отрежьте от чистой грибной ткани очень маленький кусочек треугольной формы. Осторожно отделите грибную ткань и быстро поместите внутрь пробирки на край горлышка. Если нужно, стряхните кусочек гриба со скальпеля постукивающими движениями. Положите скальпель на место и быстро закройте пробирку пробкой. Теперь несколько раз постукайте нижней частью пробирки о тыльную сторону ладони для того, чтобы переместить грибную ткань на агаровую поверхность (См. Рис. 3). Поставьте пробирку в другую консервную банку, предназначенную для хранения инокулированных пробирок.
Рис. 3 -- Перемещаем с помощью постукивания
Комментарий к тексту на рисунке: Move to Here by Tapping the Tube
against the Heel of the Hand - переместите в это место путем
постукивания пробиркой по тыльной стороне ладони, Insert Here -
поместите сюда
Есть! Теперь у нас имеются очень хорошие шансы на то, что полученная культура гриба является чистой.
Проделайте то же самое с оставшимися пробирками и грибным материалом. Изготовление нескольких пробирок с каждого образца гриба важно по той причине, что даже при самой аккуратной работе иногда случаются заражения. После проведения инокуляции очередной пробирки простерилизуйте заново скальпель или лезвие ножа на пламени и оторвите свежий кусочек гриба, чтобы открыть другой участок чистой ткани грибного тела. После того, как работа с пробирками завершена, закрутите плотнее колпачки и обверните на каждой пробирке место, на котором колпачок граничит со стеклом, при помощи микропористой ленты. Микропористая лента позволит культуре «дышать», но предотвратит попадание инородных организмов через горлышко пробирки. Пометьте пробирки перманентным маркером или небольшими наклейками , указав дату и информацию о содержимом. Наконец, поместите инокулированные пробирки в темное и прохладное место (наилучшая температура 13 - 21 градусов по Цельсию). Через некоторое время (от нескольких дней до недели) грибная ткань станет пушистой, что связано с началом роста мицелия. Через несколько недель мицелий полностью покроет поверхность агара.
Если показалась плесень (ее легко распознать по спорам зеленого, черного или другого цвета) или бактериальное заражение (обычно окрашенная лоснящаяся субстанция ), то эта культура подлежит немедленному уничтожению, а пробирки и пробки следует вымыть в горячей мыльной воде. По возможности, пробирки с зараженной культурой нужно освобождать в отдельном месте, подальше от здоровых культур. Например, выйдите на улицу и выбросите содержимое прямо в мусорный бак. Для освобождения пробирки от питательной среды можно использовать китайскую палочку для еды; среду можно извлечь сразу целым кусочком или по частям. Шаг II: Методики стерильного переноса и зерновой мицелий Стерильный перенос на ряд агаровых пробирок Полученная агаровая пробирка, содержащая грибной мицелий, является «мастер-культурой» (маточной культурой). Если есть желание размножить культуру для того, чтобы иметь ее запас или чтобы поделиться с другими грибоводами, следует перенести грибной материал из одной пробирки в несколько других пробирок. Эту работу можно выполнить, используя точно такую же методику первоначального стерильного переноса, как это было описано выше.
Картофельный агар. Метод №2
(получается около литра питательной среды)
Необходимые материалы:
10 унций или 284 грамм картофеля
¾ унции или 21.3 грамм агара
¼ унции или 8 грамм декстрозы - можно заменить столовым сахаром
Шаг 1: Смешивание ингредиентов
Вымойте картофель, но не срезайте кожуру. Порежьте на небольшие кусочки.
Сварите картофель до хорошей готовности в полулитре воды. Процедите и сохраните отвар. Картофель можно выбросить или использовать в пищу.
Смешайте декстрозу/сахар, картофельный отвар и агар в металлической или термостойкой стеклянной чашке. Добавьте воды до литра.
Шаг 2: Растворение агара
Поместите агаровую смесь в скороварку. Накройте чашку алюминиевой фольгой.
Дождитесь, пока давление в скороварке поднимется до 1 атм. Варка в течение 20 минут приведет к полному растворению агара. Оставьте скороварку для медленного остывания.
Шаг 3: Заливка агара в пробирки
С помощью варежек для микроволновки и мерного стакана заполните каждую пробирку примерно на треть объема. Вместо штатива для пробирок могут быть использованы консервные банке. Оставшийся агар можно сохранить в бутылке, закрытой хлопчатобумажным или синтепоновым тампоном, а стерилизовать позже, вместе с пробирками. Если пробирки достать не удалось, вместо них можно использовать небольшие бутылочки. Если пробирки закрываются пластиковыми колпачками, то они должны закрываться неплотно, чтобы давление в процессе стерилизации выравнивалось. Хлопчатобумажные или синтепоновые тампоны помогают избежать этой проблемы, но при этом потребуется накрыть пробирки алюминиевой фольгой, чтобы капли конденсата с крышки остывающей скороварки не попадали на пробки.
Шаг 4: Стерилизация агара
Поместите пробирки/бутылки, содержащие агар, в скороварку и стерилизуйте под давлением 1 атм. в течение 25 минут. В эти 25 минут не входит время, необходимое для достижения нужного давления в скороварке. Дайте скороварке медленно остыть. Быстрый сброс давления может привести к интенсивному вскипанию агара в пробирках, выплёскиванию его через тампоны и колпачки пробки и к возможному заражению.
Шаг 5: Наклонное расположение пробирок
Протрите 10% раствором хлорсодержащего отбеливателя стол, на котором будут расположены в наклоненном положении пробирки. Работу следует производить в помещении без сквозняков. Надев кухонные варежки, расположите горячие пробирки на столе в наклоненном положении, положив пробирки одним краем на подходящий предмет. Предварительно стоит поэкспериментировать с деревянными брусочками или стопкой журналов для того, чтобы подобрать нужный угол наклона.
После желатинизации агара закройте плотнее колпачки. Готовые пробирки или бутылки следует хранить в прохладном, свободном от пыли месте. Покрытие из алюминиевой фольги предотвратит возможность заражения пробирок до их использования.
Методики стерильной работы с грибной культурой
После того, как агаровые пробирки остыли, самое время заняться разведением грибной культуры.
Необходимые материалы:
Скальпель или очень острый нож с тонким лезвием
Спиртовка или пропановая горелка с баллончиком, зажигалка или спички Металлические консервные банки или штативы для пробирок с косым агаром и одна банка и штатив для хранения готовых пробирок Держатель для скальпеля или ножа (см. ниже примеры для самостоятельного изготовления)
Микропористый бинт (такой, как в аптечках первой помощи, продается в аптеках) или обычный бинт (более дешевый вариант) Распылитель с раствором из 10% хлорсодержащего отбеливателя и 90% воды (необязательно)
Свежее, чистое плодовое тело гриба или грибов (для начинающих микологов очень рекомендуется использовать вешенку)
Выберите место в доме, офисе или лаборатории, свободное от пыли и возможных источников плесени или грибков. Работы производите на устойчивом столе или стойке, предварительно вымыв поверхность теплой мыльной водой и вытерев насухо (для дополнительной защиты можно также обработать поверхность аэрозолем из 10% раствора отбеливателя и вытереть затем насухо чистой тряпкой или бумажной салфеткой.) Закройте все окна, чтобы свести к минимуму циркуляцию воздуха (в идеале, постарайтесь перенести работы по культивированию на утренние часы, пока воздух чист от пыли, поднимаемой в воздух активными домочадцами). Разложите все материалы в готовом для работы виде и в пределах удобной досягаемости. Поместите агаровые пробирки в металлическую консервную банку (банки) или штативы. Зажгите свет или включите светильник. Тщательно простерилизуйте лезвие скальпеля в пламени и положите скальпель на подставку. Подставку можно выгнуть из проволоки (например из старой вешалки), жестяной банки или другого подручного материала. Целью изготовления такой подставки является обеспечение устойчивого положения инструмента, чтобы его лезвие, пока оно не используется, находилось возле пламени во избежание заражения.
Для начала возьмите свежий, чистый гриб. Несмотря на то, что внешняя поверхность грибного тела может содержать бактерии и споры плесени, внутренняя ткань обычно свободна от организмов, вызывающих заражение, если только гриб не перенасыщен водой.
Оторвите или отломите часть гриба (не отрезайте с помощью ножа, потому что лезвие занесет инфекцию с внешних поверхностей). Положите гриб на стол чистой поверхностью вверх (эта поверхность не должна касаться стола). Цель тут состоит в том, чтобы получить чистую, открытую поверхность, от которой может быть отделен очень небольшой кусочек грибной ткани, а сам кусочек оставался бы, насколько это возможно, нетронутым, пока не будет помещен в пробирку.
Сейчас вам нужно расположить рабочие материалы так, чтобы пробирка, пока вы помещаете в нее кусочек грибной ткани, как можно меньшее время оставалась открытой. Для того, чтобы вероятность заражения была минимальна, недопустимо класть пробирку или пробку на стол. Этот момент представляет некоторую сложность. Будет полезно сперва попрактиковаться с пустой пробиркой перед тем, как использовать «боевую» пробирку с агаром и грибную ткань. Дальнейшие указания подразумевают, что вы - правша. Если нет, то все придется делать в зеркальном порядке. Держите левую руку так, чтобы большой палец смотрел вниз, а остальные пальцы были расположены горизонтально. Поместите пробирку между средним и безымянным пальцами левой руки так, чтобы безымянный палец был сверху, средний - снизу пробирки, а пробка смотрела в направлении от руки. Пробирку следует держать только в горизонтальном положении, чтобы частицы из воздуха не попадали в горлышко пробирки. Скошенная поверхность агара, на которую вы будете помещать грибную ткань, должна смотреть вверх. Осторожно снимите пробку с пробирки и поместите ее между безымянным пальцем и мизинцем так, чтобы мизинец был сверху, а безымянный палец - снизу. (См. Рис. 2).
Рис.. 2 -- Немного мудрёно, но практика помогает
Используя свободные указательный и большой палец левой руки, крепко возьмите кусочек гриба с чистой поверхностью, смотрящей вверх или вбок. Правой рукой уверенно возьмите скальпель, держа его за ручку наподобие карандаша. Кончиком лезвия отрежьте от чистой грибной ткани очень маленький кусочек треугольной формы. Осторожно отделите грибную ткань и быстро поместите внутрь пробирки на край горлышка. Если нужно, стряхните кусочек гриба со скальпеля постукивающими движениями. Положите скальпель на место и быстро закройте пробирку пробкой. Теперь несколько раз постукайте нижней частью пробирки о тыльную сторону ладони для того, чтобы переместить грибную ткань на агаровую поверхность (См. Рис. 3). Поставьте пробирку в другую консервную банку, предназначенную для хранения инокулированных пробирок.
Рис. 3 -- Перемещаем с помощью постукивания
Комментарий к тексту на рисунке: Move to Here by Tapping the Tube
against the Heel of the Hand - переместите в это место путем
постукивания пробиркой по тыльной стороне ладони, Insert Here -
поместите сюда
Есть! Теперь у нас имеются очень хорошие шансы на то, что полученная культура гриба является чистой.
Проделайте то же самое с оставшимися пробирками и грибным материалом. Изготовление нескольких пробирок с каждого образца гриба важно по той причине, что даже при самой аккуратной работе иногда случаются заражения. После проведения инокуляции очередной пробирки простерилизуйте заново скальпель или лезвие ножа на пламени и оторвите свежий кусочек гриба, чтобы открыть другой участок чистой ткани грибного тела. После того, как работа с пробирками завершена, закрутите плотнее колпачки и обверните на каждой пробирке место, на котором колпачок граничит со стеклом, при помощи микропористой ленты. Микропористая лента позволит культуре «дышать», но предотвратит попадание инородных организмов через горлышко пробирки. Пометьте пробирки перманентным маркером или небольшими наклейками , указав дату и информацию о содержимом. Наконец, поместите инокулированные пробирки в темное и прохладное место (наилучшая температура 13 - 21 градусов по Цельсию). Через некоторое время (от нескольких дней до недели) грибная ткань станет пушистой, что связано с началом роста мицелия. Через несколько недель мицелий полностью покроет поверхность агара.
Если показалась плесень (ее легко распознать по спорам зеленого, черного или другого цвета) или бактериальное заражение (обычно окрашенная лоснящаяся субстанция ), то эта культура подлежит немедленному уничтожению, а пробирки и пробки следует вымыть в горячей мыльной воде. По возможности, пробирки с зараженной культурой нужно освобождать в отдельном месте, подальше от здоровых культур. Например, выйдите на улицу и выбросите содержимое прямо в мусорный бак. Для освобождения пробирки от питательной среды можно использовать китайскую палочку для еды; среду можно извлечь сразу целым кусочком или по частям. Шаг II: Методики стерильного переноса и зерновой мицелий Стерильный перенос на ряд агаровых пробирок Полученная агаровая пробирка, содержащая грибной мицелий, является «мастер-культурой» (маточной культурой). Если есть желание размножить культуру для того, чтобы иметь ее запас или чтобы поделиться с другими грибоводами, следует перенести грибной материал из одной пробирки в несколько других пробирок. Эту работу можно выполнить, используя точно такую же методику первоначального стерильного переноса, как это было описано выше.
Здравствуйте.
Большие статьи действительно не отображаются на форуме, сделано это для того, чтобы лишний раз не "грузить" пользователей. Если хотите разместить большую статью, то в таком случае, можно или размещать статьи в блоге, или присылать ссылку на redaktor@fermer.ru для публикации статьи на портале. В ответном письме Вам будет отправлена ссылка на эту статью у нас на портале.
Которую можно будет публиковать на форуме.
Извините , уважаемый redaktor !
Примем к сведению .